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目的：众所周知,肺癌是目前世界上最常见的恶性肿瘤之一。近几年在医学科研人员的不断努力下,针对肺癌的相关治疗方法不断出现,并取得了有目共睹的疗效。重组人血管内皮抑素(恩度)联合化疗药物是临床上常见的肺癌治疗方法,但有关其与化疗药物联用的的时间窗,目前尚不明确。前期实验表明,重组人血管内皮抑素(恩度)联合紫杉醇作用于C57/BL6小鼠Lewis肺癌模型,发现先恩度后紫杉醇组抑瘤效果明显优于恩度与紫杉醇同时组,以及先紫杉醇后恩度组,然而具体使用恩度后第几天联合化疗药抑瘤物效果最好还不清楚,而我们实验就是研究此。本实验通过测定瘤重及计算抑瘤率、瘤体积来绘制生长曲线、用高效液相色谱法测定瘤组织中紫杉醇浓度、通过免疫组化判定微血管成熟度及以乏氧情况、再加上小动物活体成像技术直接观察活体小鼠的瘤组织血管情况等方法研究重组人血管内皮抑素(恩度)联合紫杉醇作用于C57/BL6小鼠Lewis肺癌模型的时间窗。方法：本实验包含2个部分。第一部分：取48只C57/BL6小鼠,随机分成8组,即Group1组(恩度1天后给予紫杉醇)、Group2组(恩度2天给予紫杉醇)、Group3组(恩度3天后给予紫杉醇)、Group4(恩度4天后给予紫杉醇)组、Group5组(恩度5天后给予紫杉醇), Group6组(恩度6天后给予紫杉醇)、Group7(恩度7天后给予紫杉醇)组和Group8组(恩度8天后给予紫杉醇),每组6只,通过皮下注射对数生长期的Lewis肺癌细胞悬液建立Lewis肺癌动物模型,在动物体内通过瘤块传代3代,待进入实验组小鼠瘤体长到一定大小后,开始药物干预。在重组人血管内皮抑素(10mg/kg)基础上联合紫杉醇(10mg/kg)腹腔注射,重组人血管内皮抑素连续给药8天,各组分别于重组人血管内皮抑素连续腹腔注射后1、2、3、4、5、6、7、8天给药,每天观察各组小鼠的一般情况和成瘤率,每隔一天测量小鼠肿瘤体积大小,给药结束次日颈椎脱位处死小鼠,完整剥离肿瘤,测量肿瘤体重、抑瘤率,免疫组化判定肿瘤微血管成熟度以及乏氧程度,通过使用高效液相色谱法(HPLC)测量各组肿瘤组织中紫杉醇的浓度。第二部分：根据第一部分实验数据,我们统计出Group4组(先恩度4天)的抑瘤效果最好,取9只小鼠,分为3组：A组(先恩度3天)B组(先恩度4天)和C组(先恩度5天),每组3只,分别于连续腹腔注射重组人血管内皮抑素3、4、5天后给予紫杉醇。通过活体成像技术直接观察瘤组织内新生血管状况,进一步推到结果。结果：第一部分：与Groupl组(先恩度1天)、Group2组(先恩度2天)、Group6组(先恩度6天)、Group?(先恩度7天)组和Group8组(先恩度8天)相比,Group3组(先恩度3天)、Group4(先恩度4天)组和Group5组(先恩度5天)体积均数均较低,差异有统计学意义,P<0.05。Group3组(先恩度3天)、Grou p4(先恩度4天)组和Group5组(先恩度5天)之间相比差异无统计学意义,P>0.05。八组小鼠肿瘤体重均数差异无统计学意义,选择Group8组为对照组,可以看出Group3组(先恩度3天)、Group4(先恩度4天)组和Group5组(先恩度5天)的抑瘤率较好于其它各组,其分别为20.5%、24.66%、23.74%。免疫组化测a-SMA：与Groupl组(先恩度1天)、Group2组(先恩度2天)、Group6组(先恩度6天)、Group7组(先恩度7天)和Group8组(先恩度8天)相比,Group3组(先恩度3天)、Group4组(先恩度4天)和Group5组(先恩度5天)a-SMA均数均较高,差异有明显统计学意义,P<0.01,其中Group4组(先恩度4天)与Group3组(先恩度3天)和Group5组(先恩度5天)相比,差异明显有统计学意义,P<0.01。;免疫组化测HIF-1a：与Group1组(先恩度1天)、Group2组(先恩度2天)、Group6组(先恩度6天)、Group7组(先恩度7天)和Group8组(先恩度8天)相比,Group3组(先恩度3天)、Group4组(先恩度4天)和Group5组(先恩度5天)HIF-1a均数均较低,差异明显有统计学意义,P<0.01。其中Group4组(先恩度4天)与Group5组(先恩度5天)相比,差异有统计学意义,P<0.05。Group4组(先恩度4天)和Group3组(先恩度3天)相比,差异明显有统计学意义,P<0.01。高效液相技术测紫杉醇浓度：与Group1组(先恩度1天)、Group2组(先恩度2天)、Group6组(先恩度6天)、Group?组(先恩度7天)和Group8组(先恩度8天)相比,Group3组(先恩度3天)、Group4组(先恩度4天)和Group5组(先恩度5天)药物浓度均数较高,差异有明显统计学意义,P<0.01, Group3组(先恩度3天)、Group4组(先恩度4天)和Group5组(先恩度5天)之间相比,差异无统计学意义,P>0.05。第二部分实验：GroupB组(先恩度4天),与GroupA组(先恩度3天)和GroupC组(先恩度5天)相比,瘤组织中微血管平均光密度值较低,差异有统计学意义,P<0.05。GroupA组(先恩度3天)和GroupC组(先恩度5天)相比,差异无统计学意义,P>0.05。结论：1、重组人血管内皮抑素(恩度)与紫杉醇联用作用于C57/BL6 Lewis肺癌小鼠,通过肿瘤体积测定与分析,发现先恩度3—5天后予以紫杉醇抑瘤效果更明显。2、重组人血管内皮抑素(恩度)与紫杉醇联用作用于C57/BL6Lewis肺癌小鼠,发现先恩度3—5天后予以紫杉醇：周细胞数量明显增加,乏氧程度得到明显改善,药物进入瘤组织的浓度增加,瘤血管结构与功能趋于成熟。3、重组人血管内皮抑素(恩度)与紫杉醇联用作用于C57/BL6Lewis肺癌小鼠,经小动物活体成像技术发现先恩度4后予以紫杉醇,其瘤组织中的微血管计数低于先恩度3天后和先恩度5天后。4、重组人血管内皮抑素(恩度)与紫杉醇联用作用于C57/BL6 Lewis肺癌小鼠的时间窗是先恩度3—5天。而最佳时间窗是先恩度4天：肿瘤体积最小,周细胞数量最多,乏氧程度改善最为明显,药物进入瘤组织的浓度最高,活体动物瘤体微血管计数值最低。