基于人脂多糖结合蛋白和聚羟基脂肪酸结合蛋白PhaP的内毒素去除方法

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内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁外壁中的特有结构,是其在生长、分裂或死亡过程中释放到环境中的有毒物质。内毒素分子化学性质非常稳定,并且在水溶液中易聚合成不同分子量的聚合物,使得生物制品中内毒素的去除变得非常困难。聚羟基脂肪酸酯(PHA)颗粒结合蛋白质(PhaP)对PHA以及其它疏水性聚酯具有较强的亲和力。人脂多糖结合蛋白(hLBP)是人体血浆内自然存在的内毒素受体。在本论文研究中,融合蛋白rhLBP–PhaP基因在毕赤酵母GS115中分泌表达。收集到的融合蛋白通过PhaP锚定在PHB颗粒表面,用于水和蛋白质溶液中内毒素的去除研究。牛血清白蛋白(BSA)溶液,卵清蛋白(ovalbumin)溶液,胰凝乳蛋白酶原(basic proteinα-chymotrypsinogen)溶液三种蛋白质溶液作为模式被使用,用于研究蛋白质溶液中内毒素的去除效率和蛋白质的回收率,以及离子强度和酸碱度对去除效果的影响。结果表明:本论文研究制作的亲和颗粒(rhLBP- PhaP-PHB颗粒)的内毒素去除率可达90%以上,并且内毒素的去除率和蛋白质的回收率几乎不受离子强度的影响,但是酸碱度对其有一定的影响。我们的研究结果表明,基于rhLBP- PhaP-PHB颗粒的内毒素去除系统,具有准备简单,无毒和高效的特点,非常适合蛋白质纯化工艺中内毒素的去除。
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