背景:血液透析为终末期肾病(end stage renal disease,ESRD)患者带了治疗的希望,血管通路的建立是患者进行维持性血液透析的前提。深静脉留置导管以可快速建立,损伤小,透析效果好等优点在临床上得到广泛应用。然而,随着透析导管留置时间的延长,相应的并发症逐渐增多,其中导管相关性感染是最严重的并发症之一。导管相关性感染常常是导致导管拔除,甚至患者死亡的重要原因。血液透析深静脉留置导管相关性感染一旦发生,即使全身使用敏感抗生素抗感染治疗都很难达到治疗效果。已有文献报道,用肝素联合抗生素封管,治疗血液透析深静脉留置导管相关性感染;然而,肝素与抗生素有配伍禁忌,效果欠佳。在2002年,我们假设,深静脉导管植入体内,在患者进行血液透析时,根据流体力学原理,导管管壁中心部位的血流速度较快,而靠近导管壁的血流速度相对较慢,血浆蛋白有可能滞留并吸附在深静脉导管壁上,形成一层血浆蛋白生物膜;而深静脉导管需要多次开关,细菌便可入侵并植入导管内壁血浆蛋白生物膜内。在每次透析过程中,血液流经导管,膜内细菌及其毒素释放入血,导致患者出现畏寒,高热,血象升高等全身中毒症状。因此,我们设想,用尿激酶联合抗生素封管,尿激酶可能溶解血浆蛋白生物膜,使细菌暴露,联合抗生素杀菌作用杀灭细菌,达到彻底清除感染灶的目的。经过我们多年的临床探索,采用尿激酶联合抗生素封管3-5周期,取得了非常满意的效果。该文旨在通过体外实验方法,证实其机制。目的体外建立血浆蛋白生物膜和细菌植入血浆蛋白生物膜模型,证实深静脉留置导管相关性感染机制。用不同浓度尿激酶及尿激酶联合抗生素和不同浓度肝素及肝素联合抗生素对细菌植入血浆蛋白生物膜的干预,研究尿激酶对其作用机制。方法1.将血液透析深静脉导管,纵向切开,留取导管动静脉腔的间隔部分,修剪边缘,切成2mm×3mm大小,面积为6mm~2大小的长方形小块。2.取血液透析患者的血浆3.5ml,平均分成7份,每份加入一片导管小块,置37.2度温箱培养,12h摇匀一次,每次5min;每24h取一片导管小块,进行共聚焦显微镜和/或扫描电镜镜观察,7天后在导管内壁上建立血浆蛋白生物膜模型。3.采集凝固酶阴性葡萄球菌菌种,药敏实验获得敏感抗生素阿米卡星;用半固体培养法保存菌种;血琼脂平板培养形成菌落;用无菌生理盐水配制浓度为0.5×10~6的细菌悬液。4.按上述方法建立血浆蛋白生物膜后,向培养液中加入浓度为0.5×10~6凝固酶阴性葡萄球菌菌液,12h摇匀一次并隔日半量换液,每24小时取一片导管小块,进行共聚焦显微镜观察,7天后在导管内壁上建立细菌植入血浆蛋白生物膜模型。5.对已在导管内壁上建立细菌植入血浆蛋白生物膜模型分4组进行干预,生理盐水组,抗生素组,尿激酶及尿激酶联合抗生素组、肝素及肝素联合抗生素组,在不同时段进行共聚焦显微镜观察及导管内壁残余细菌植入血浆蛋白生物膜内活菌计数。结果1.用血液透析患者血浆培养7天后,导管内壁可形成一层血浆蛋白生物膜。2.用血液透析患者血浆培养7天,再加入菌液继续培养7天后,导管内壁可见细菌植入血浆蛋白生物膜。3.该菌种对硫酸阿米卡星敏感。4.不同浓度尿激酶及其联合阿米卡星对细菌植入血浆蛋白生物膜的干预,随着尿激酶浓度增加,其作用明显;不同浓度肝素及其联合阿米卡星对细菌植入血浆蛋白生物膜的作用欠佳;随着肝素浓度增加,其破坏作用不明显。结论1.成功在深静脉导管内壁建立血浆蛋白生物膜及细菌植入血浆蛋白生物膜模型。2.尿激酶通过溶解导管内壁细菌植入血浆蛋白生物膜,使细菌暴露,利于被抗生素清除。