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猪流感病毒是猪流感的病原体，该病流行至今已有90年多的历史。对于猪流感的检测试剂盒，市场上的H1N1亚型猪流感检测试剂盒价格昂贵。本研究的目的是借助Bac-to-Bac杆状病毒系统表达H1N1猪流感病毒血凝素(HA)蛋白作为检测抗原建立HA蛋白抗体间接ELISA检测方法。
将H1N1猪流感病毒（A/swine/zhej iang/02/H1N1）株的HA全长去信号肽基因（fHA）和HA1去信号基因(sHAl)及EGFP-HA(eHA)基因分别插入到pFastBacHTA转移载体中，在细菌Tn7转座子的作用下与DH10Bac感受态细胞中的杆状病毒基因组发生转座，从而形成重组杆状病毒载体rBacmid/AcNPV/fHA、rBacmid/AcNPV/eHA、rBacmid/AcNPV/sHA1，分别转染Sf9细胞，rBacmid/AcNPV/eHA转染后可以看见明显的绿色荧光蛋白的表达。rBacmid/AcNPV/fHA和rBacmid/AcNPV/sHA1分别转染Sf9细胞后，间接免疫荧光试验(IFA)和Western-blot证实，rBacmid/AcNPV/fHA表达的fHA蛋白能与His单抗和H1N1亚型全病毒免疫的猪血清发生特异性的反应，其大小约为65kD的目的蛋白。rBacmid/AcNPV/sHA1表达的sHA1蛋白只能与His单抗发生特异性的反应，其大小约为40kD的sHA1目的蛋白。
用β-丙内酯灭活的A/swine/zhejiang/02(H1N1)株感染的SPF胚尿囊液经超速离心和蔗糖密度梯度离心纯化后的病毒作为检测抗原，探索建立全病毒的ELISA检测方法。通过系列的条件筛选，确立了0.24ug/ml抗原包被浓度、pH8.5的Tris-HCl缓冲液为包被液、1∶400稀释的待检血清、酶标二抗稀释倍数为1∶2000、1％BSA/PBST为封闭液、0.1％BSA/PBS缓冲液为样品稀释液、待检血清和酶标二抗的最适反应时间均为45min;最佳显色时间为10min的ELISA反应体系。建立的方法不与抗猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病毒、猪圆环病毒的阳性血清发生交叉反应。板间的变异系数(CV)值为1.39％-6.74％，批间的CV值为3.57％-7.61％。与IFA比较的阳性符合率为88.30％、阴性符合率93.29％,总符合率为93.13％。这些数据表明本试验建立的ELISA方法能为猪流感抗体检测提供快速、简便、可靠的检测技术体系。