【摘 要】
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农抗9512-3是一种新型大环内酯类类化合物，是一种高效、低毒、广谱的杀虫抗生素，在农业生产中具有良好的应用，具有广阔的市场前景。本试验对9512-3生产菌株进行了一系列的物理化
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农抗9512-3是一种新型大环内酯类类化合物，是一种高效、低毒、广谱的杀虫抗生素，在农业生产中具有良好的应用，具有广阔的市场前景。本试验对9512-3生产菌株进行了一系列的物理化学诱变并建立了原生质体制备、融合及再生的最佳条件，在此基础上应用基因组重排技术，展开了对农抗9512-3的高产菌种育种工作。
通过对原始菌株进行分离复壮，获得一株遗传性能较为稳定的出发菌株Dor-90（效价204.9ug/ml），经过一系列诱变获得菌株UL-33（高产菌株，效价313.2ug/ml）和D7（长势良好但效价很低），并通过硫酸链霉素和庆大霉素抗性平板筛选，得到了Y34（Str+Gen－）菌株和Z18（Str－Gen+）菌株。
以UL-33为出发菌株进行原生质体制备条件探索，试验结果显示菌株UL-33原生质体制备的最佳条件为250ml三角瓶装有30 ml含0.5％甘氨酸的YEME培养基，孢子悬液接种，28℃，200r/min培养42h；3000r/min收集菌丝体，并用浓度为10.3％蔗糖溶液清洗2次；在溶菌酶浓度为3mg/ml的P缓冲液悬浮菌丝体，30℃下酶解60min，原生质体制备完成。原生质体在PEG1000浓度为40％时，融合率最高。
以Y34（Str+Gen－）、z18（Str－Gen+）、D7（长势良好但效价很低）和AA732（实验室原始保存菌株）为亲本进行基因组重排育种研究，结果显示随着重排的深入，重组群体中高产菌株的出现频率增加。通过连续五轮基因重排，融合效率可达42.1％（趋于稳定）并筛选获得高产菌株F5-41（效价478.5ug/ml），其发酵效价较原始菌株UL-33提高了52.8％，且经过连续五次传代，结果显示该菌株稳定性良好。
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