猪链球菌病疫苗的研制

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对上海地区40多个规模性养猪场1997-2000年间猪链球菌病的流行情况进行了调查,从发病猪群中分离的19株链球菌,对其进行病原特性鉴定及血清学定型,结果7株为C群的马链球菌兽疫亚种(S.equi subsp. zooepidemicus),4株为R群的猪链球菌2型(Strep. suis type 2),B群及D群链球菌各一株,一株与A群和C群有交叉反应,7株未能定型。 在马链球菌兽疫亚种和猪链球菌2型的分离株中筛选毒力强、免疫原性好的ATCC35246和JS2-4株作为制备疫苗用的生产菌株。比较不同培养基、培养方法对细菌生长的影响,优化培养条件。 建立了人工感染猪链球菌2型的仔猪动物模型,为疫苗效力检验提供了手段。 制备了氢氧化铝胶二联灭活苗。无菌及安全检验合格后,肌肉接种仔猪2ml/头,免疫15天后,分别用ATCC35246和JS2-4株攻击,结果猪链球菌2型可获100%保护(10/10),马链球菌兽疫亚种可获90%保护(9/10)。二联苗免疫后4周内抗体水平持续上升,从第五周开始逐渐下降,经过二免后,抗体水平迅速回升,两个半月后仍维持较高水平。攻毒保护试验和抗体消长规律的测定表明,猪链球菌病二联苗具有良好的免疫保护作用。 建立了检测猪链球菌二联灭活苗抗体的间接ELISA方法,试验证明该法特异性好,比琼扩试验敏感。检测氢氧化铝胶、蜂胶、矿物油佐剂上述二联疫苗的抗体消长情况,铝胶苗的起始抗体比油佐剂和蜂胶苗高,油佐剂苗JS2-4株的抗体水平与铝胶苗相近,但ATCC35246株的抗体水平比铝胶苗低,蜂胶苗的抗体水平最低。铝胶苗抗体水平在首免第四周达到高峰以后下降较快,但二免后迅速上升,120天后仍维持较高水平(1:1000)。 应用热酸法提取马链球菌兽疫亚种类M蛋白,并采用羟基磷灰石(HAT)层析和冷酒精沉淀法进行纯化,结果得到较纯的类M蛋白,用两种纯化方法得到的类M蛋白免疫健康小鼠,结果保护率均为100%,而全菌苗的保护率为83%。表明类M蛋白亚单位疫苗有很好的发展前景。
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