农杆菌介导的抗除草剂基因转化水稻的研究

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hexiaole632
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水稻是世界上重要的粮食作物,并已成为分子生物学研究的模式作物之一。本研究利用农杆菌介导法将Bar基因导入北方粳型恢复系津稻162和津稻18中。构建了阿特拉津氯水解酶基因植物表达载体,并将其转入粳稻保持系滓稻107中。本研究的主要结果: 1.利用农杆菌介导法将pDsBar1300/EHA105转入水稻恢复系津稻162和津稻18中,分别获得77株和55株独立转化株系,并对转基因T0代进行了Basta涂布试验,其抗性植株率分别为92%和78%。对抗性转基因株系做PCR检测,均能扩增出400bp的Bar基因特异条带,证明外源基因已整合到水稻基因组中。对转基因T1代进行潮霉素抗性鉴定,除个别株系分离比异常外,大多数转基因株系表现3:1的分离。 2.构建了阿特拉津氯水解酶基因植物表达载体p1301-atzA。构建方法为:第一步将用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切得到的atzA基因与也经过这两个酶双酶切的pBluescript Ⅱ SK(+/-)载体连接,构建成pBS-SK-atzA,用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定重组子插入片段大小为1.5kb;第二步将pBS-SK-atzA用SalⅠ和SacⅠ双酶切,同也经过这两个酶双酶切的pCambia1301载体连接,用SalⅠ-SacⅠ双酶切鉴定重组子插入片段大小为1.5kb,从而构建成p1301~atzA。通过冻融法将p1301-atzA导入农杆菌EHA105,完成了atzA基因植物转化系统的构建。 3.利用构建完成的atzA基因植物转化系统,对水稻保持系津稻107进行了转化,共得到249株独立的转基因株系,经PCR和PCR—Southern检测证明atzA基因已整合到水稻基因组中。 4.对转抗除草剂基因atzA水稻做除草剂抗性检测,结果表明,不同转基因水稻株系对除草剂阿特拉津普遍具有抗性,但抗性表达水平存在差异。
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