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针对邻苯二甲酸酯类(PAEs)塑化剂污染食品的问题,本论文对邻苯二甲酸酯类污染物开展了免疫检测方法的研究。 针对邻苯二甲酸二甲酯(DMP),以4-硝基邻苯二甲酸二甲酯为原料,将硝基还原为氨基,制备半抗原4-氨基邻苯二甲酸二甲酯(4-DMAP)。利用重氮化法将半抗原与牛血清蛋白(BSA)偶联制备免疫原4-DMAP-BSA。利用戊二醛法将半抗原与鸡卵白蛋白(OVA)偶联制备包被原4-DMAP-OVA。用免疫原4-DMAP-BSA共免疫4只新西兰大耳白兔制备邻苯二甲酸二甲酯抗血清,最佳抗血清是由No.2兔子产生,抗血清效价为1∶256000,1000 ng/mL邻苯二甲酸二甲酯的抑制率为85.23%。通过对方法工作条件的优化,最终确定包被量为0.03μg/well,抗体稀释度为1∶4000,封闭液为0.5%乳粉/PBS,样品稀释液为pH7.4、0.01 M的PBS。最佳工作条件下建立间接竞争ELISA,方法灵敏度IC50值为23.31±2.62 ng/mL;检出限IC15值为2.01±0.33ng/mL。该方法与其它17种邻苯二甲酸二甲酯结构类似物的交叉反应率均低于0.1%。选择白酒、蔬菜和饮料共十个样品(经GC-MS方法检测,样品中邻苯二甲酸二甲酯的含量为0 ng/g(ng/mL))进行添加回收实验,添加水平分别为100 ng/g(ng/mL)、500ng/g(ng/mL)和5000 ng/g(ng/mL),应用所建立的间接竞争ELISA方法检测,回收率在84.90%-119.17%之间,且日内和日间的变异系数(n=3)均小于15%,ELISA方法的检测结果与GC-MS的检测结果具有良好一致性(R2=0.977),说明方法具有很好的准确性,可以用于食品样品中邻苯二甲酸二甲酯的快速检测。 针对邻苯二甲酸二环己酯(DCHP),以4-氨基邻苯二甲酸为原料,通过与环己醇发生酯化反应制备半抗原4-氨基邻苯二甲酸二环己酯(4-DCHAP)。利用重氮化法制备免疫原4-DCHAP-KLH和4-DCHAP-BSA,利用戊二醛法制备免疫原4-DCHAP-BSA和包被原4-DCHAP-OVA。三种免疫原共免疫6只新西兰大耳白兔制备邻苯二甲酸二环己酯抗血清。最佳抗血清是由免疫原4-DCHAP-KLH免疫得到的No.6兔子产生,效价为1∶16000,1000 ng/mL邻苯二甲酸二环己酯的抑制率为95.88%。通过对方法工作条件的优化,最终确定包被量为0.30μg/well,抗体稀释度1∶1500。最佳工作条件下建立间接竞争ELISA,方法灵敏度IC50为211.27±10.65 ng/mL;检出限IC15为25.67±3.40 ng/mL。