目的：毛乳头细胞在皮肤创伤修复中具有重要作用，可以作为种子细胞来源参与皮肤创伤后修复，目前利用毛乳头细胞构建皮肤的研究在国内外是新领域。本研究分离培养毛乳头细胞（dermal papilla cells，DPCs），对DPCs进行体外诱导，以证明其干细胞特性，为其作为毛囊化皮肤种子细胞提供依据。　　 在毛乳头细胞的分离培养实验中，采用机械分离与酶消化相结合的方法获取毛乳头组织，利用组织培养法培养DPCs，为下一步的体外诱导打下基础。　　 通过对体外培养的大鼠的DPCs体外诱导分化的潜能进行研究，可以进一步了解毛乳头细胞的干细胞生物学特性，为今后皮肤组织细胞的体外诱导提供方向和方法的选择。　　 方法：应用机械法拔取新生SD大鼠完整生长初期毛囊，组织块法分离和培养毛乳头细胞。　　 1.将7日龄SD仔鼠须消毒处理，在体式显微镜下分离毛囊，经过离心，加入2m10.25％胶原酶孵化60分钟，再将DPCs组织转移至培养瓶中，在DMEM培养液中培养，用于毛乳头细胞传代培养。　　 将第二代细胞分组并加入MTT液孵育4h，吸弃培养液后以490mm波长读取OD值，与只加培养液的空白组对照，绘制细胞生长曲线。　　 2.利用常规的成骨诱导方法对DPCs进行体外诱导。将生长状态良好的第2代毛乳头细胞分别以1×105/ml的密度接种于24孔培养板中，加入正常培养基37℃5％CO2孵箱中培养；待细胞分别铺满瓶底的80％时，换成成骨诱导培养液继续培养7天，以加入正常培养基的孔作为对照；　　 结果：DPCs的分离培养与传代培养：以胶原酶分离游离培养出来的毛乳头细胞呈圆形或椭圆形。贴壁后细胞从组织中迁出，呈放射状向四周生长，细胞多呈三角形或多角形，细胞体积较大。传代后细胞呈多角形或梭形，融合后的细胞呈明显的多层化凝集现象。经多次传代的DPCs逐渐失去凝集能力，细胞形态逐渐向梭形演变，当传至第6代时，细胞生长状态逐渐变差，继续培养的细胞开始出现死亡漂浮现象。毛乳头细胞生长曲线显示细胞生长总体呈“滞缓-对数生长-平台”生长模式。　　 DPCs经成骨诱导液培养3D后可见细胞表面的黑色粒状物，ALP测定活性升高，7天后镜下可见多个黑色结节形成，结节大小不一，茜素红染色结节着红色。对照组则未见结节形成。　　 结论：我们将机械分离与酶消化相结合的方法，先用显微解剖分离出毛乳头组织，再根据毛囊结构特点，以胶原酶消化完整毛囊，一定时间后毛囊下端毛乳头先松散而真皮鞘未分解，此时即可将毛乳头组织拣出。此方法培养出的毛乳头细胞，无污染，贴壁迅速，优于单纯的机械分离方法。毛乳头细胞为多角形或梭形，呈明显的多层化凝集现象；细胞生长曲线显示细胞生长总体呈“滞缓-对数生长-平台”生长模式。　　 对大鼠触须部的毛乳头细胞进行体外诱导，其分化具有成骨细胞特性的细胞，证实了毛乳头细胞的横向分化能力。毛囊周期性生长的特性提示有干细胞生长的特性，本实验证实毛乳头细胞具有成骨干细胞特性。　　 总之，毛囊细胞可作为种子细胞，不但增加了皮肤种子细胞的来源范围，也为构建含毛囊结构的皮肤提供新的思路与方法。也为皮肤缺损的修复提供了新的治疗方法。