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目的:检测不同浓度三氧化二砷(ATO)作用人皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)Hut-78细胞株前后细胞周期分布和凋亡坏死比例,同时检测PML、PML-Ⅰ PML-Ⅳ、PML-Ⅴ、p53及survivin等基因(?)mRNA表达的情况及各基因间相关关系,探讨ATO诱导皮肤T细胞淋巴瘤凋亡的可能机制。方法:以2、5、10umol/L浓度的ATO分别干预Hut-78细胞24、48、72h,采用PI单标记流式细胞术及TUNEL法,检测实验组和对照组细胞株凋亡坏死比例及细胞周期分布;同时采用SYBR green Ⅰ qRT-PCR方法检测各组Hut-78细胞株中PML、PML-Ⅰ、PML-Ⅳ、PML-Ⅴ、p53及survivin基因mRNA表达情况,并行相关性分析。结果:1、PI单标记流式细胞术检测ATO对细胞周期影响结果显示:在0-10umol/L范围内,随着ATO浓度的增加,S期细胞比例逐渐降低,G0/G1期细胞比例先降低后增高,G2/M期细胞比例先增高后降低;当ATO浓度为2umol/L时,G0/G1期比例达最低,G2/M期比例达最高;之后,当ATO浓度大于2umol/L时,G0/G1期细胞比例的增高幅度同G2/M期与S期细胞比例降低之和相当。细胞周期各阶段细胞比例及细胞凋亡比例在2-5umol/L时变化最明显。2、PI单标记流式细胞术检测细胞凋亡及坏死比例结果分析显示:随着ATO浓度的增加及作用时间的延长,细胞凋亡坏死比例逐渐增高,并且在2-5umol/L范围内,增高最明显。不同浓度ATO作用Hut-78细胞24h后,对照组分别与5和10umol/L组间细胞凋亡坏死比例差异有统计学意义(p=0.035;p=0.014);作用48h后,对照组分别与5umol/L和10umol/L组间,2umol/L组分别与5和10umol/L组间细胞凋亡及坏死比例差异有统计学意义(p<0.05);作用72h后,除5umol/L组与10umol/L组间细胞凋亡及坏死比例差异无统计学意义(p=0.513),其余各组间差异均有统计学意义(p<0.05)。3、原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡及坏死比例结果分析显示:随着ATO浓度的增加及作用时间的延长,细胞凋亡比例和坏死比例逐渐增高。不同浓度ATO作用Hut-78细胞48h后,对照组与10umol/L组细胞凋亡比例差异有统计学意义(p=0.031);作用72h后,对照组分别与2、5、10umol/L组间细胞凋亡比例差异有统计学意义(p<0.05)。对照组与5umol/L和10umol/L组、2umol/L组与5umol/L和10umol/L组细胞坏死比例间差异均有统计学意义(p=0.000)。4、实时荧光定量PCR (RT-PCR)检测基因表达结果分析:当ATO浓度一定时,随着作用时间的延长(24-72h内),PML、PML-Ⅰ基因mRNA的表达均逐渐降低;PML-Ⅳ、PML-Ⅴ基因mRNA的表达在对照组和2umol/L组随作用时间的延长逐渐下降,在5umol/L和10umol/L组,先增高后降低;p53、survivin基因(?)mRNA的表达在对照组和2umol/L组随作用时间的延长逐渐下降,在5umol/L和10umol/L组呈上升趋势。当ATO作用24h后,PML、PML-Ⅰ、PML-Ⅳ、p53、survivin基因1nRNA随ATO浓度的增加逐渐下降,PML-Ⅴ基因(?)mRNA先增高后下降;当ATO作用48h后,随ATO浓度的增高,PML-Ⅳ和PML-Ⅴ基因mRNA的表达逐渐增高,PML-Ⅰ和survivin基因mRNA的表达先增高后降低,当ATO为5umol/L时,其表达最高,PML及p53基因mRNA无明显变化;当ATO作用72h后,随ATO浓度的增高,PML及其异构体、survivin基因mRNA的表达先增高后降低,在5umol/L时,表达最高,p53基因mRNA表达无明显变化。5、PML及其异构体、p53及survivin基因mRNA间的相关性分析显示:PML及其异构体mRNA的表达分别与p53、survivin基因mRNA的表达无相关性(p>0.05),p53与survivin基因mRNA的表达有相关性(r=0.734,p=0.007<0.05),PML与PML-Ⅰ、 PML-Ⅴ间的相关关系可能与其本身含量有关。结论:1、低浓度ATO能明显抑制Hut-78细胞增殖,高浓度ATO可以诱导细胞凋亡和坏死,并且呈时间剂量依赖性,而且细胞凋亡比例总是大于坏死比例。2、ATO可能是通过调节Hut-78细胞周期,使细胞阻滞在G2/M期从而抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡。3、ATO对Hut-78细胞的增殖抑制、诱导凋亡和坏死等作用可能与PML、PML-Ⅰ.PML-Ⅳ及PML-Ⅴ的参与有关,并且PML及其异构体参与的凋亡途径可能为p53非依赖性的,可能也不依赖于survivin基因的表达。