宫腔粘连（intrauterine adhesions，IUA）是指创伤、感染等引起的子宫内膜基底层受损，胶原合成及细胞外基质(extracellular matrix，ECM)增加，引起子宫内膜的纤维化修复。宫腔粘连的临床症状主要是月经量减少甚至闭经、继发不孕、慢性腹痛以及流产、早产、前置胎盘、胎盘粘连甚至胎盘植入等严重产科并发症，给患者及家庭带来了极大的心理及经济压力。　　羊膜具有减轻炎症反应、抑制瘢痕增生、分泌生物活性物质、干细胞分化潜能等特性，目前羊膜在角膜、结膜移植等眼表重建及烧伤、创伤等皮肤移植中表现了巨大的潜力。本课题将以体外细胞实验及动物实验为基础，探索羊膜在TCRA术后预防宫腔再粘连的安全性、可行性及其可能的机制。　　第一部分 羊膜对子宫内膜基质细胞增殖及迁移作用的影响　　目的　　通过原代培养人子宫内膜基质细胞（Endometrial Stromal Cells，ESC），观察羊膜支架对子宫内膜细胞生长状态及对细胞迁徙、增殖能力的影响。　　材料和方法　　选取因不明原因不孕行诊刮术患者正常增生期子宫内膜组织32例，足月剖宫产产妇的羊膜组织30例。将接种于羊膜基质面的细胞定义为实验组，接种于普通培养基的细胞定义为对照组。采用细胞划痕实验观察两组细胞的迁徙能力，CCK-8法检测细胞的增殖率，RT-PCR法测定PCNA的表达。　　采用SPSS21.0软件统计分析，重复测量方差分析比较各组不同时间点的差异，one-way ANOVA法分析各组间资料，组间两两比较采用LSD-t法，检验水准α=0.05。　　结果　　1 羊膜支架上细胞拉伸更长，生长状态更好，排列欠规则并交通呈网状。　　2 实验组迁移能力显著高于对照组(P<0.001)，细胞增殖率和PCNA mRNA的相对表达量高于对照组(P<0.001)。　　结论　　羊膜促进子宫内膜基质细胞迁移及增殖能力。　　第二部分 羊膜在兔子宫内膜损伤模型中抗纤维化作用的初步研究　　目的　　机械及感染双重损伤法构建新西兰大白兔子宫内膜损伤模型，观察羊膜移植对子宫内膜形态、腺体数量、纤维化面积、TGF-β1 及 MMP-2 表达水平的影响。　　材料和方法　　选取3 000g～5 000g健康雌性6-8周龄的新西兰大白兔48只，随机分为4组，A组（正常对照组）：行假手术，不造模。B组（羊膜对照组）：宫腔内放置羊膜；C组（模型组）：建模后不作治疗；D组（羊膜治疗组）：建模1周后宫腔内放置羊膜。采用机械和感染双重损伤的方法构建新西兰大白兔子宫内膜损伤模型。分别于治疗前（手术后 1 周）、治疗后 2 周、治疗后4 周各处死 4只，收集兔双侧子宫内膜组织，观察子宫内膜的形态学变化，HE染色检测各组兔子宫内膜腺体计数数量，Masson 计算子宫内膜纤维化面积，免疫组化法、RT-PCR法检测TGF-β1及MMP-2表达水平。　　采用SPSS21.0软件统计分析，各组不同时间点的比较采用重复测量资料设计（repeated mesurement design）法分析，各组间资料的分析采用one-way ANOVA法，采用LSD-t法进行组间两两比较，检验水准α=0.05。　　结果　　1.子宫内膜形态学变化　　正常对照组（A组）：子宫外观为淡粉色，内膜区表面无充血。羊膜对照组（B组）：羊膜放置后1周由透明转变为米白色皱缩残留物，2周后羊膜部分分解，4周后宫腔仍有羊膜残留物，子宫内膜无明显变化。模型组（C组）：随着建模时间的延长，子宫粗细不均，表面水肿并轻度积水，子宫内膜面凹凸不平，颜色暗红，可见大量充血点。羊膜治疗组（D组）：随着治疗时间的延长，子宫表面积水逐渐吸收，4周后子宫内膜形态基本恢复。　　2.子宫内膜腺体数量　　A组、B组各时间点子宫内膜腺体数量无差异（P=0.658，P=0.284，P=0.147）。治疗前（手术后1周）：C组、D组子宫内膜腺体数量均显著低于A组(P＜0.001)；D组与C组无差异（P=0.507）；治疗后2、4周：D组子宫内膜腺体数量均高于C组（P<0.001）；D组子宫内膜腺体数量随着治疗时间的延长而逐渐增高，相邻时间点有统计学差异(P＜0.001)。　　3.子宫内膜纤维化面积　　胶原纤维染色后呈蓝紫色，A 组与 B 组子宫内膜间质表达的少量胶原纤维呈梭形，排列整齐；治疗前C、D组胶原纤维增多且排列紊乱；D组治疗后胶原纤维相对稀疏且排列较整齐。　　A 组、B 组各时间点子宫内膜纤维化面积无差异（P=1.000 ，P=0.863 ，P=0.519）。治疗前：D组、C组子宫内膜纤维化面积均显著高于A组(P＜0.001)；D组与C组无差异（P=0.632）；治疗后2、4周：D组各时间点纤维化面积均低于C组（P<0.001），且随着治疗时间的延长，D组子宫内膜纤维化面积逐渐减少，相邻时间点差异均有统计学意义(P＜0.001)。　　4.各组子宫内膜组织MMP-2表达水平　　A组、B组各时间点子宫内膜组织MMP-2表达水平无差异（P＞0.05）。治疗前：C组、D组MMP-2表达水平均显著低于A组(P＜0.001)；D组与C组无差异（P＞0.05）；治疗后2、4周：D组MMP-2表达水平均高于C组（P<0.01）；随着治疗时间的延长，D组MMP-2表达逐渐增高，相邻两时间点有统计学差异（P<0.01）。　　5.各组子宫内膜组织TGF-β1表达水平　　A组、B组各时间点各组子宫内膜组织TGF-β1表达水平无差异（P＞0.05）。治疗前：C组、D组子宫内膜组织TGF-β1表达水平均显著高于A组(P＜0.001)；D组与C组无差异（P＞0.05）；治疗后2、4周：D组TGF-β1表达水平均高于C 组（P<0.001）；随着治疗时间的延长，D 组 TGF-β1 表达逐渐降低，相邻两时间点有统计学差异（P<0.001）。　　结论：　　（1）羊膜本身对子宫内膜腺体数量、间质纤维化无明显影响，提示羊膜可以安全用于宫腔内。　　（2）羊膜移植入损伤后的宫腔，兔子宫内膜腺体数量增加而纤维化面积比率减少，TGF-β1表达量减少、MMP-2表达增加。