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目的:
①对三姐妹的文献进行系统整理;②对南宁产三姐妹进行生药鉴别，确定其性状、显微结构特征，对不同季节采收的三姐妹进行化学成分预试，比较所含化学成分类型异同，并对三姐妹茎进行HPLC和UV分析，为三姐妹生药鉴别提供依据;③对不同季节采收的三姐妹分根、茎、叶，全草进行体外抗乙型肝炎病毒作用研究，初步评价其抗乙型肝炎病毒作用，比较不同季节采三姐妹不同药用部位抗乙型肝炎病毒的强弱。
方法:
①对三姐妹的国内外研究文献进行系统查阅整理、分析归纳形成综述（附后）;②对南宁产三姐妹进行性状鉴别、显微鉴别。③用高效液相色谱法对南宁产三姐妹的茎进行定性鉴别，用化学成分预试方法比较不同季节采的三姐妹不同药用部位所含化学成分类型异同。④以2.2.15细胞为模型，加入不同季节采三姐妹根茎叶水提物的含药血清培养8天，用显微镜观察细胞病变，用噻唑盐(MTT)比色分析法检测三姐妹根茎叶对2.2.15细胞的毒性，并比较强弱。⑤用酶联免疫法（ELISA法）分别检测不同季节采收的三姐妹不同药用部位水提液含药血清对2.2.15细胞分泌的表面抗原(HBsAg)和e抗原(HbeAg)的抑制作用，并比较作用强弱。
结果:
①文献检索表明目前国内外还没有南宁产三姐妹的高效液相分析及不同季节三姐妹化学预试等生药鉴别和根、茎、叶、全草的体外抗乙型肝炎病毒的研究报道。
②三姐妹显微鉴别:本文首次对三姐妹的嫩茎和老茎作了对比。三姐妹的显微特征明显，嫩茎非腺毛多由9个细胞组成，一个细胞较大，其他细胞较小，组成类三角形;嫩茎六棱明显，老茎棱角不明显;腺毛的腺柄单细胞，腺头2个细胞。上述特征可作为制定三姐妹的生药学质量标准的参考依据。本实验研究在南宁产三姐妹的叶横切面中未发现有草酸钙方晶，与文献不同。
③高效液相色谱及紫外光谱鉴别:在高效液相色谱中，齐墩果酸对照品的色谱峰保留时间为21.9min，供试品中齐墩果酸的色谱峰保留时间为21.8min，供试品在齐墩果酸对照品的色谱峰出现的相应位置有一个峰。UV检测，对照品溶液在223nm处有吸收峰，供试品溶液在224nm、261nm、274nm处有吸收峰，供试品溶液和对照品在相同的位置有吸收峰，HPLC法和UV法可作为三姐妹定性鉴别的方法之一。
④化学成分预试:不同季节采三姐妹的根、茎、叶均可能含有糖、多糖、皂甙类，鞣质及有机酸类成分，酚、植物甾醇、三萜类成分;皂甙类预试验反应中，9月份三姐妹根的阳性反应较明显，而9月份三姐妹叶及3月份三姐妹茎的反应不够明显。黄酮类成分盐酸镁粉反应中，9月份三姐妹茎呈阳性，而9月份三姐妹根、叶及3月份三姐妹根、茎则无阳性反应。
⑤细胞毒性试验:本研究用MTT法结合细胞形态变化来确定各药物含药血清对2.2.15细胞的毒性作用。3月份三姐妹茎的水提液，9月份三姐妹叶的水提液，9月份三姐妹全草的水提液对细胞毒性较小，3月份三姐妹根的水提液对细胞毒性较大。各个试药40％含药血清对2.2.15细胞的平均破坏率分别为:3月份三姐妹茎的水提液7.46％＜9月份三姐妹全草的水提液16.51％＜9月份三姐妹叶的水提液21.30％＜9月份三姐妹根的水提液26.08％＜9月份三姐妹茎的水提液29.10％＜3月份三姐妹叶的水提液45.52％＜3月份三姐妹根的水提液60.19％＜3月份三姐妹全草的水提液64.21％。各个试药20％含药血清对2.2.15细胞的平均破坏率分别为:3月份三姐妹茎的水提液1.67％＜9月份三姐妹全草的水提液3.87％＜9月份三姐妹茎的水提液10.49％＜9月份三姐妹叶的水提液11.52％＜3月份三姐妹全草的水提液15.80％＜9月份三姐妹根的水提液17.97％＜3月份三姐妹叶的水提液25.42％＜3月份三姐妹根的水提液53.01％。
⑥含药血清体外抗乙型肝炎病毒实验:不同季节采的三姐妹不同药用部位对HBeAg和HBsAg均具显著抑制作用，且抑制作用随着剂量增加而增强，对HBsAg抑制作用强于对HBeAg抑制作用。各个试药40％含药血清对HBeAg的抑制率均大于50％，其中，3月份三姐妹全草的水提液抑制率最大(76.17％)，3月份三姐妹根的水提液的抑制率最低(59.58％);各试药20％含药血清中，9月份三姐妹根的水提液抑制率最大(59.38％)，9月份三姐妹全草水提液的抑制率最低(24.98％)。各试药40％及20％含药血清对HBsAg抑制作用均大于50％，有显著作用。其中，40％含药血清对HBsAg抑制率最高的是3月份三姐妹根水提液(96.22％)，最低的是3月份三姐妹茎水提液(71.91％)。20％舍药血清对HBsAg抑制率最高的是9月份三姐妹全草水提液(92.04％)，最低的是3月份三姐妹茎水提液(57.90％)。3月茎水提液和9月全草水提液高效低毒，而3月根水提液毒性较大。
结论:
本文首次①对南宁产三姐妹进行了嫩茎与老茎的生药鉴别对比研究，提供了原植物、性状及显微、理化(HPLC、UV)鉴别方法;②对南宁产三姐妹进行了化学成分探讨，实验结果表明其可能含有糖、多糖、皂甙、鞣质、有机酸、酚、植物甾醇、三萜类等成分;③对南宁产三姐妹不同季节不同部位样品进行细胞毒性试验，提供了各样品细胞毒性大小的实验数据，其中3月份南宁产三姐妹茎水提液的细胞毒性最小。④对不同季节不同药用部位南宁产三姐妹进行了体外抗乙型肝炎病毒实验研究，不同季节不同部位的南宁产三姐妹均对HBeAg和HBsAg有抑制作用，对HBsAg抑制作用强于对HBeAg抑制作用。本论文研究内容经科技查新证实，目前尚未见与上述特点相同的国内文献报道。