蒺藜（Tribulus terrestris L．）为入载我国药典的传统中药，主要药用部位的药理药效研究甚多，而对蒺藜全草入药的认识尚属起步。课题组前期发现蒺藜全草皂苷（saponins from Tribulus terrestris L．简称STT）可有效降低高血糖病理状态下糖基化水平的工作基础，提示本文就STT干预糖基化终产物（Advanced Glycation End P roducts，简称AGEs）导致糖尿病肾病恶性病变的潜在效应进行深入追踪，为此拟以人肾癌细胞786-0为靶细胞，从细胞水平和分子水平层面上展开STT对肾癌的体外抑制效应及其作用机制的研究。首先采用MTT法、SRB法观察了STT体外对于786-0肾癌细胞生长的抑制作用，并比较了STT对人胚胎肾细胞体外生长的影响，结果显示：25～100μg／ml的STT对于786-0细胞具有显著的抑制作用和明显的剂量依赖关系；25～200μg／ml的STT对于人胚胎肾细胞的毒作用明显小于对786-0的细胞毒作用。为了进一步探明STT的抑癌机制，研究采用wright染色法、吖啶橙染色法和透射电子显微镜观察了STT作用肿瘤细胞后细胞形态和超微结构的变化；利用琼脂糖凝胶电泳和二苯胺法测定DNA的片断化；应用碘化丙啶（PI）染色的流式细胞术法检测了STT对786-0细胞周期的影响；结合免疫荧光标记，以流式细胞术检测STT对786-0细胞周期蛋白表达的影响和STT作用后细胞抗细胞凋亡蛋白Bcl-2含量及细胞内钙离子浓度的变化、线粒体膜电位的差异。结果显示：①786-0细胞经STT作用后呈早期凋亡特征：细胞变小皱缩，核固缩、浓聚，核仁裂解，染色质凝集边集；但琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术结果表明，STT致786-0细胞凋亡率不高。②STT通过下调786-0细胞的cyclin D1蛋白水平表达，从而影响786-0细胞周期调控，即下调G₀／G₁期细胞比例，使细胞DNA的合成受到阻滞；G₂／M期细胞比例减少，可减少细胞有丝分裂。③抗凋亡蛋白Bcl-2的表达下调是STT抑癌作用的分子机理之一。④STT能够引起786-0细胞线粒体跨膜电位丧失，激活线粒体通路，继而诱导786-0走向凋亡。⑤STT可显著升高细胞内Ca²⁺水平，同时细胞内外Ca²⁺水平的改变均可增强STT对786-0细胞的杀伤作用，在培养基中加入2m mol／L CaCl₂可显著抑制STT所致786-0细胞的DNA片段化，而EGTA或ZnSO₄不影响STT诱导786-0细胞DNA片段化程度，提示STT可激活钙离子依赖性核酸内切酶（如DNaseⅠ或DNaseⅩ等），引起一系列的生化反应。药效物质基础的含量稳定可靠并有严格的质量标准，是中药现代化的一个重要环节。为此，针对STT在相关适应症存在有效剂量不稳，利用本实验室建立的反相高效液相色谱法[Kromasil C18（250mm×4.6mm，5um）和示差折光检测结合的技术支撑，采用100％甲醇洗脱，流速为1mL／min]，分析不同产地、不同保存时间对STT主要甾体皂苷元成分的影响，结果发现生药和提取物不同保存时间对STT的HPLC图谱和抑癌生物学活性均存在差异，STT单体药效学追踪发现，海柯皂苷元是STT体外抗肿瘤作用的主要物质基础之一。已经共识，中药所含微量元素亦是中药药效物质基础的重要组成部分。研究根据中药配位化学学说的理论指导，针对蒺藜全草资源在该领域的信息盲点，结合本实验室的六种材料提取物对AGEs形成的干预作用，运用模糊聚类分析探讨这几种材料中微量元素与其药效的相关性。采用电感耦合等离子体发射光谱仪（Inductively Coupled Plasma—Atomic Emission Spectrometry，简称ICP—AES）测定铜、镁、锌、锰、铬、钼、钒的含量，结合锌／铜及锌／锰比值，以数据极差法进行统计指标的标准化处理；以数量积法算出被分类对象之间的相关系数，确定论域上的模糊矩阵进行聚类分析。研究结果显示：几种材料对AGEs的形成有抑制作用，刺梨黄酮和沙棘果渣黄酮的作用效果接近；相关系数λ=0.75时，上述两种物质聚类相似。STT对AGEs的形成抑制作用远不如其它材料，只在GXL体系中有效果，但在体外抗肿瘤作用上蒺藜提取物明显强于其它材料。STT分离的两种皂苷元含有羟基等配位基团，与微量元素可能存在配位效应，STT中所含有机成分、微量元素含量和种类与抑制786-0细胞增殖效应、干预AGEs形成的作用等密切相关。