高等植物是数以百万计天然产物的来源,所含的化合物往往具有特定功能,其中许多具有可被人类利用的生物活性价值,可为新药开发提供先导化合物,或作为生物医学研究的重要工具。本研究通过体外细胞模型,利用细胞毒MTT法,从32科52属56种药用植物中筛选出叶下珠、珠子草、使君子、鸦胆子和千里光等5种具有明显抗肿瘤效果的药用植物,以及星苹果、人心果、油梨和文丁果等4种亚热带地区境外引种的植物也具有明显抗癌效果,明确抗肿瘤植物的活性部位;利用酪氨酸酶多巴速率氧化法测定模型,筛选到蔓荆子、叶下珠和珠子草等3种中草药,以及星苹果、文丁果和人心果等3种亚热带地区境外引种植物对蘑菇酪氨酸酶具有抑制作用。　　 根据抗癌筛选结果,确定珠子草抗癌活性部位为乙酸乙酯层和正丁醇层。利用天然产物化学研究方法,从珠子草乙酸乙酯层分离到活性物质,通过波谱鉴定化合物结构为短叶苏木酚酸乙酯,其对SMMC7721和Bel-7402两种肝癌细胞作用72h的IC50值分别为35.89±3.99μg/mL和24.31±0.66μg/mL,而对正常肝细胞Chang-liver的IC50值为73.49±9.18μg/mL;从珠子草正丁醇层分离到活性物质,通过波谱鉴定化合物结构为柯里拉京,其对SMMC7721和Bel-7402两种肝癌细胞作用72h的IC50值分别为19.67±2.76μg/mL和13.56±0.47μg/mL,而对正常肝细胞Chang-liver的IC50值为92.22±4.29μg/mL。　　 对于绞股蓝研究,首先通过HPLC分析确定用75％乙醇溶液提取绞股蓝总皂苷(GYP),45％乙醇提取极性绞股蓝皂苷(GYP1),90％乙醇提取弱极性绞股蓝皂苷(GYP2);正交实验结果表明在70℃水浴中以30倍量的45％乙醇加热提取12 h为最佳条件提取GYP1,在60℃水浴中以30倍量的90％乙醇加热提取6 h为最佳条件提取GYP2。利用MTT法测定绞股蓝总皂苷、极性皂苷绞股蓝皂苷和弱极性绞股蓝皂苷对肝癌细胞的抑制作用,结果表明绞股蓝总皂苷和弱极性绞股蓝皂苷对肝癌细胞SMMC7721具有抗癌活性,半抑制率IC50值分别为165.83±14.12μg/mL和113.97±9.26μg/mL,极性绞股蓝皂苷没有抗癌活性;其次利用中压制备色谱分离纯化极性绞股蓝皂苷,获得2个皂苷单体化合物,其化学名分别为2-羟基-3-O-β-D-吡喃葡萄糖(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖-20(S)-原人参二醇-20-O-β-D-阿拉伯吡喃糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷和2-羟基-3-O-β-D-吡喃葡萄糖(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖-20(S)-原人参二醇-20-O-βD-吡喃葡萄糖苷;此外还利用灰绿曲霉、构巢曲霉和黑曲霉微生物转化绞股蓝皂苷,从灰绿曲霉转化产物中分离到具有抗癌活性的皂苷单体化合物2α,3β,12β,20(S)-四羟基-24-达玛烯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷,其对肝癌细胞SMMC7721有抑制作用,半抑制率IC50值为91.66μg/mL,对正常肝细胞抑制Chang-liver基本没有抑制作用。　　 为进一步探索柯里拉京抗肝癌作用效果和作用机理。采用裸鼠实体瘤的动物模型,对柯里拉京体内抗肿瘤药理药效进行评价。结果表明柯里拉京并没有明显抑制肿瘤块在裸鼠体内的生长,柯里拉京能抑制动物体内肿瘤的形成及血管生成;解剖裸鼠后,以肝转移灶为统计对象。统计分析显示,实验组肝转移灶数目比对照明显减少,表明柯里拉京具有抑制癌细胞转移作用。进一步利用ELISA检测柯里拉京对肝癌细胞SMMC7721用药后,转化生长因子的表达量TGFβ1与Smad1通路影响,结果表明柯里拉京通过调控TGF-β1-Smad1信号通路,从而抑制肝癌细胞转移。此外,流式细胞仪检测柯里拉京对细胞周期的影响,结果表明柯里拉京能导致肝癌细胞SMMC7721和Bel7402细胞周期阻滞在G2/M,进一步通过Western-blot杂交检测细胞周期因子cdc2和cyclin B1的变化,证实柯里拉京通过调控cyclin B1/Cdc2信号通路,诱导肝癌细胞SMMC7721阻滞在G2/M期。以上结果表明,柯里拉京通过调控TGF-β1-Smad1信号通路和抑制cyclin B1/Cdc2介导的促细胞增殖信号通路等机制,从而抑制肿瘤细胞增殖与转移。