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目的:双酚A(bisphenol A, BPA),是一种广泛使用的化工原料,添加BPA可使塑料制品具有轻巧耐用、无色透明以及加强抗冲击性等特点,并有效防止水果和蔬菜从内部侵蚀金属容器,所以BPA成为制造聚碳酸酯、环氧树脂、食品包装、牙科填充剂、食品罐头涂料和医疗器械等产品的重要原料。BPA具有毒作用剂量小、潜伏时间长等特点,对健康造成多种潜在危害,国内外许多学者对BPA的毒性作用进行了研究报道。目前对BPA的毒性研究多集中在内分泌系统、生殖系统、神经系统等方面,其遗传毒性还有待进一步研究。本实验通过体外染毒检测BPA对中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)的细胞存活率、DNA的直接损伤作用、微核率以及染色体畸变率,并通过Ames试验检测BPA的致突变性,通过将上述检测不同遗传学终点的试验相结合探讨BPA的遗传毒性。方法:(1)以仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)作为实验系统,选用四甲基偶氮唑盐法(即MTT比色法)检测不同浓度双酚A对CHO细胞作用不同时间后,对细胞存活率的影响;(2)采用单细胞凝胶电泳试验(即SCGE彗星试验),了解不同浓度及不同作用时间下双酚A对CHO细胞DNA单链断裂的损伤程度;(3)采用微核试验研究不同浓度双酚A对CHO细胞微核率的影响;(4)采用染色体畸变分析检测不同浓度双酚A对CHO细胞染色体畸变率及诱导的主要畸变类型;(5)通过Ames试验了解不同浓度双酚A的致突变效应。结果:(1)MTT试验结果显示,分别经12h及24h染毒处理后,当双酚A终浓度为40μmol/L时,CHO细胞的存活率显著高于阴性对照组。当浓度高于80μmol/L时,细胞存活率呈现下降趋势,各染毒组吸光度值与阴性对照组相比均具有统计学差异。(2)单细胞凝胶电泳实验结果显示,经12h及24h处理后,双酚A浓度高于80μmol/L时,可引起CHO细胞的拖尾率、尾部DNA百分含量及尾长增加。(3)微核试验和染色体畸变试验表明,在双酚A处理24h后,当浓度高于100μmol/L时,CHO细胞的微核率和染色体畸变率显著增加。其中染色体畸变的类型以断裂、无着丝粒断片和裂隙为主。(4)Ames试验检测的BPA染毒浓度为10μg/皿~5mg/皿共九个剂量组,其结果为阴性。在活化和非活化条件下,与阴性对照组比较,可见部分菌株的回变菌落数有所增加,但并无统计学差异。结论:(1)外培养条件下,双酚A在染毒浓度为40μmol/L作用12h后,可显著刺激细胞的生长,表现出一定的刺激效应。从80μmol/L开始,染毒12h对CHO细胞的增殖有明显的抑制作用,表现出细胞毒性作用。(2)双酚A可引起CHO细胞的拖尾率、尾部DNA百分含量、尾长及Olive尾矩增加。提示双酚A可引起体外培养的细胞产生DNA的单链损伤。(3)双酚A能显著增加CHO细胞的微核率和染色体畸变率。其中染色体畸变的类型以断裂、无着丝粒断片和裂隙为主。(4)Ames试验未检测到双酚A的致基因突变作用。在活化和非活化条件下,与阴性对照组相比,可见部分菌株的回变菌落数有增加趋势,但并无统计学意义。提示双酚A可能并不存在致基因突变的作用。