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目的:检测microRNA-184(miR-184)、TNFAIP2在人脑胶质瘤组织标本及胶质瘤细胞株及非瘤脑组织标本中的表达情况;探讨miR-184对胶质瘤细胞增殖、侵袭及凋亡等功能的影响;揭示miR-184和TNFAIP2在胶质瘤中的相互作用关系;为寻找到诊断和治疗胶质瘤及判断胶质瘤预后和复发情况的新的靶基因奠定基础。方法:1.根据基因芯片技术检测胶质瘤细胞株SHG139中miRNAs的表达谱,选择表达下调的具有统计学意义的miR-184作为研究对象。应用qRT-PCR方法进一步验证miR-184在胶质瘤细胞株和非瘤脑组织中的表达情况。2.扩大胶质瘤组织标本后,再次通过实时qRT-PCR方法检测miR-184在49例胶质瘤组织标本中的表达情况。3.通过Lipofectamine2000脂质体法将miR-184 mimics、miR-184 inhibitor和negative control oligonucleotide转染到胶质瘤细胞株U87和U251中。通过CCK-8细胞增殖试验检测miR-184对胶质瘤细胞U87和U251的增殖影响;应用Annexin V PE Apoptosis Detection Kit PE和流式细胞仪检测U87及U251细胞的早期凋亡率;通过划痕试验以及Transwell试验检测miR-184对人脑胶质瘤细胞U87和U251迁移侵袭能力的影响。4.查阅文献及通过分析生物信息软件(Targetscan、mi Rwalk、miRnada)发现认为mi RNA-184可与TNFAIP2(肿瘤坏死α诱导蛋白2)的3,-UTR区结合。通过qRT-PCR技术检测TNFAIP2在81例胶质瘤组织、5株胶质瘤细胞和5例非瘤脑组织中的表达情况;再通过Western blot方法检测TNFAIP2蛋白在5株胶质瘤细胞中的表达情况;miR-184 mimics、inhibitor和negative control转染U87和U251细胞后再通过Western blot方法检测TNFAIP2蛋白表达情况。5.使用慢病毒转染方法构建稳定表达mir-184和对照mirna(mir-nc)的u87细胞,再同时分别接种至裸鼠皮下和颅内;定期动态测量裸鼠皮下包块的最大长径和宽径;在磁共振t2图像下观察肿瘤变化情况并且在接种后的第35天处死裸鼠取出移植瘤称重后石蜡包埋固定并制作成病理切片;免疫组织检测tnfaip2及ki-67的表达情况。结果:1.mir-184在5株胶质瘤细胞和49例胶质瘤组织标本中表达下调mirna芯片数据分析结果提示,mir-184在胶质瘤细胞中表达下调;进一步运用qrt-pcr验证发现mir-184在5株胶质瘤细胞(u87、u251、u373、a172、shg44)中的表达明显低于非瘤脑组织(p<0.01);mir-184在49例胶质瘤组织标本中表达明显低于8例非瘤脑组织标本(p<0.01),并随着胶质瘤恶性级别增加mir-184在胶质瘤组织标本中表达量逐渐下调。2.过表达mir-184可抑制u87和u251细胞的增殖、细胞周期进展并诱导凋亡u87和u251细胞株分别转染mir-184mimics和对照mirna(mir-nc),然后通过cck-8比色法在酶联免疫检测仪450nm波长下测量吸光度,联连续监测3天。与对照mir-nc组相比较mir-184可明显抑制u87和u251细胞的增殖(p<0.01);同时,流式细胞仪分析发现过表达mir-184可明显增加u87和u251细胞中g0/g1期所在细胞周期中的比例,而处于s期的细胞则显著下降(p<0.05);与对照组相比较,过表达mir-184可诱导u87和u251细胞早期凋亡,下调mir-184的表达可减少细胞凋亡数。3.过表达mir-184可抑制u87和u251细胞的侵袭和迁移划痕试验结果显示,与对照组相比较mir-184过表达组可抑制u87及u251细胞划痕区的愈合;transwell实验提示mir-184过表达组u87和u251细胞的穿膜细胞数少于对照组。这一结果说明,mir-184可明显抑制u251和u87的侵袭和迁移能力。4.tnfaip2在胶质瘤组织和胶质瘤细胞中表达上调qrt-pcr结果提示tnfaip2的mrna在5株胶质瘤细胞中的表达水平比在5例非瘤脑组织中的表达上调;在81例胶质瘤组织标本中的表达比在非瘤脑组织中的表达上调;westernblot结果进一步发现tnfaip2蛋白在5株胶质瘤细胞中的表达均高于在正常人星形细胞1800中的表达。因此,可推测在胶质瘤中TNFAIP2和miR-184的表达负相关。5.MiR-184在U87和U251中可负向调控TNFAIP2的表达用miR-184 mimics、inhibitor和对照miRNA转染U87和U251细胞,稳定转染后提取细胞总RNA和蛋白质。qRT-PCR和Western blot结果均显示过表达miR-184可显著下调TNFAIP2蛋白的表达;下调miR-184可上调TNFAIP2的表达。6.MiR-184可抑制U87裸鼠体内生长并抑制Ki-67和TNFAIP2的表达与U87-miR-NC组相比较,U87-miR-184组裸鼠皮下肿瘤生长明显受到抑制;U87-miR-184组肿瘤比U87-miR-NC组小,第35天时处死裸鼠并取出肿瘤测质量,U87-miR-184组皮下肿瘤质量为(0.27±0.10g)比U87-mi R-NC组皮下肿瘤质量(0.64±0.08g)小,差距有统计学意义(P<0.01);裸鼠颅内肿瘤标本切片HE染色显示与对照组相比,U87-mi R-184组肿瘤体积明显较小;免疫组化检测发现miR-184明显抑制了增殖指数Ki-67及靶基因TNFAIP2的表达。实验证实miR-184可显著抑制脑胶质瘤细胞U87裸鼠体内的生长,增殖。结论:(1)发现miR-184在胶质瘤组织标本和胶质瘤细胞株中表达下调,TNFAIP2然而在胶质瘤组织及细胞株中表达上调;(2)过表达mi R-184可抑制胶质瘤细胞U87和U251的侵袭和迁移,过表达miR-184可抑制U87和U251细胞的增殖、细胞周期进展并诱导其凋亡;(3)MiR-184在U87和U251中可负向调控TNFAIP2的表达;(4)裸鼠体内实验发现过表达miR-184可抑制U87细胞在裸鼠体内的移植瘤生长,miR-184可以靶向调控TNFAIP2蛋白的表达。