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金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)是导致奶牛乳房炎最常见也是最主要的病原菌。近几年耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicilin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)从牛乳和乳制品中分离的报道较多。MRSA 的多重耐药性已经对临床上奶牛乳房炎的治疗带来巨大挑战。目前MRSA不仅对所有β-内酰胺类抗菌药物耐药外,往往还呈现出多重耐药性,从而影响到奶牛乳房炎的临床治疗。尤其是 ST398 型的 MRSA 被公认为是人和动物相关的 MRSA,因此分离和鉴定牛源MRSA、对其进行耐药性及分子遗传学分析,明确本地区牛源MRSA耐药情况流行菌株的基因型别,探讨新疆北部地区牛源MRSA菌株的耐药特点、流行趋势和进化特点,可为新疆北部地区集约化牛场内临床兽医正确使用抗菌药提供科学依据,也为奶牛乳房炎的防治、MRSA的监测提供理论依据。 本研究采集新疆北部地区(乌鲁木齐209份、昌吉210份、石河子223份和伊犁305份)奶牛养殖场临床及亚临床乳房炎奶牛的乳汁947份及牛场工作人员和其他人群的咽拭子40份,对样品进行分离、鉴定。并利用PCR方法对nuc耐热核酸酶基因和mecA耐药基因进行扩增,共分离鉴定19株牛源和1株人源MRSA,分离率为2.1%。 采用微量肉汤稀释法对分离的19株牛源和1株人源MRSA进行了21种抗菌药物耐药性检测。结果显示,牛源MRSA对阿莫西林、氨苄西林、头孢噻呋、头孢西丁、青霉素、克拉霉素、诺氟沙星、克林霉素、磺胺嘧啶钠、红霉素和四环素的耐药率高于60%,对头孢呋辛耐药率达100%;而对庆大霉素和多西环素等的敏感性高于60%;分离菌株多重耐药情况严重,其中耐受10种及10种以上药物的菌株达79%;人源MRSA菌株对四环素和磺胺甲恶唑的耐药特点表现为敏感,对其他药物均体现耐药。 利用多位点序列分型(MLST)法和葡萄球菌蛋白A (spa)分型法对19株牛源和1株人源MRSA株进行分子遗传分析。首先对20株MRSA的7种基因tpi、yqiL、arcC、aroE、g1pF、gmk和pta进行扩增和序列测定,并将这些序列与国际数据库比对分析。结果显示,19株牛源MRSA分离株分别属于12个ST型,其ST型包括ST2393 (10.5%),ST188 (5.3%),ST97 (5.3%)等。其中ST398 (36.8%)为主要流行的ST型。19株牛源MRSA可分为7个spa型,t034 (n=7)为优势spa型,其次是t189 (n=3)和t4030 (n=3),t267 (n=2),t359 (n=2)、t114 (n=1),和t7589 (n=1)。其中t034-ST398型的菌株共有3株,1株人源MRSA属于t034-ST398。综上结果,本研究发现新疆北部地区牛源MRSA的MLST型主要为ST398型,spa型主要为t034型,而1例人源MRSA分子分型ST398-t034型。本研究中表明新疆北部地区流行的牛源ST398及ST188不同于以往国内外有关牛源MRSA报道,且这2种基因型与国内外发现的人源MRSA具有相关性,表明存在牛源与人源MRSA传播的趋势。