拟除虫菊酯(Pyrethroids,PD)类农药是以天然除虫菊酯为基础发展起来的具有高效、低毒、低残留等特点的一类杀虫剂,主要用于农业和卫生害虫的防治。随着PD的广泛使用,其对哺乳动物神经系统的毒性作用已成为毒理学领域的研究热点。　　 谷氨酸(Glutamate,Glu)是哺乳动物中枢神经系统中最重要的兴奋性神经递质,也是一种潜在的神经毒素。大量研究表明,Glu递质传递紊乱在PD的兴奋性神经毒性中起着至关重要的作用。研究发现,溴氰菊酯染毒大鼠大脑皮层、海马和小脑中Glu含量显著增加,氯氰菊酯或氯菊酯染毒大鼠大脑皮层、海马Glu没有升高反而显著降低,关于PD对Glu水平的影响尚存争议。　　 由于Glu不能穿过血脑屏障,释放入突触间隙的神经递质可通过酶解、重摄取及扩散等方式灭活,以防止其对受体过度刺激。突触间隙内过多的Glu主要通过星形胶质细胞(Astrocyles,AC)膜上的谷氨酸转运体(Glutamate Transporters,GluTs)将Glu转运到细胞内,从而维持突触间隙内Glu水平。谷氨酸转运体-1(Glutamate Transporter-1,GLT-1)是GluTs一种主要亚型,主要在AC膜上表达,在中枢神经系统内广泛分布。GLT-1在终止Glu神经能神经传递,维持细胞外液Glu浓度处于正常水平发挥重要作用。文献报道,在体外PD可致GluTs摄取功能下降,关于PD对Glu摄取功能影响的体内研究国内外未见报道。　　 谷氨酰胺合成酶(Glutamine Synthetase,GS)和谷氨酰胺酶(Phosphate-activated Glutaminase,PAG)是脑内Glu代谢的关键酶。重摄取的Glu在AC中经GS作用合成谷氨酰胺(Glutamine,Gin),Gin经PAG催化作用将Gin水解成Glu,储存在突触囊泡中,当受到刺激后又被释放到突触间隙。研究表明,乙体氯氰菊酯染毒小鼠脑组织GS活性降低,该药对PAG影响的研究尚未见报道。　　 乙体氯氰菊酯是目前应用较为广泛的Ⅱ型PD类农药。本研究通过对乙体氯氰菊酯染毒小鼠脑组织Glu水平、GluTs摄取能力和PAG活性,以及GLT-1、PAGmRNA水平的研究,探讨PD的神经毒性,为该类农药的中毒防治提供科学依据。　　 材料与方法：　　 一、动物分组及染毒　　 健康成年昆明种小鼠按体重随机分为4组,雌雄各半,一次经口灌胃方式分别给予0、20、40、80mg/kg剂量的乙体氯氰菊酯,灌胃量为0.2ml/10g体重,以食用色拉油稀释受试物质,对照组给予等量色拉油,分别于染毒后2h、4h,乙醚麻醉处理,取脑组织供试。　　 二、观察指标及检测方法　　 (一)症状观察　　 染毒后连续观察并记录小鼠中毒症状出现的时间、中毒表现及死亡情况。　　 (二)Glu水平　　 采用高效液相色谱法检测小鼠脑组织Glu水平,检测结果以每毫克脑组织含Glu微摩尔数表示。　　 (三)GluTs摄取能力　　 用预冷的0.32mol/L蔗糖溶液将小鼠脑组织制成10%匀浆液,提取突触小体,考马斯亮蓝法测定蛋白含量,在闪烁计数器上以3H谱道测定样品的放射活性,GluTs摄取能力以每毫克组织蛋白每分钟计数表示。　　 (四)PAG活性　　 用预冷PBS匀浆液将脑组织制成10%匀浆液,采用分光光度计法检测PAG活性,考马斯亮蓝法测定蛋白含量,检测结果以每分钟每毫克组织蛋白催化生成Glu微摩尔数表示。　　 (五)PAG、GLT-1mRNA水平　　 Trizol试剂提取脑组织中的总RNA,采用Real-time逆转录试剂盒将mRNA逆转录为cDNA,采用SYBR Green 1嵌合染料法对PAG、GLT-1进行Real-time PCR,β-actin作为内参基因,以PAG、GLT-1的Ct值计算其相对起始模板浓度作为该基因的相对表达量。　　 三、统计分析　　 计量资料数据用-x±s表示,用SPSS13.0统计软件进行单因素方差分析,组间两两比较用LSD法,检验水准α=0.05。　　 结果：　　 一、症状观察　　 80mg/kg剂量组全部小鼠于染毒1h后出现舔身、不安、抓搔等轻微兴奋症状,2h后陆续出现流涎、痉挛、共济失调等中毒症状,其中1只雌鼠出现濒死状态;40mg/kg剂量组个别小鼠于染毒2h后出现轻微兴奋症状;20mg/kg剂量组小鼠在整个受试期间未见异常,实验期间无动物死亡。　　 二、Glu水平　　 乙体氯氰菊酯染毒后2h,各组小鼠脑组织Glu水平相比无统计学差异(P＞0.05):染毒后4h小鼠脑组织Glu水平随着染毒剂量的增加而逐渐降低,其中80mg/kg剂量组小鼠脑组织Glu水平低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)。　　 三、GluTs摄取能力　　 乙体氯氰菊酯染毒后2h,各剂量组小鼠脑组织GluTs摄取能力相比无统计学差异(P＞0.05);染毒后4h,80mg/kg剂量组小鼠脑组织GluTs摄取能力高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);40、20mg/kg剂量组小鼠脑组织GluTs摄取能力与对照组相比无统计学差异(P＞0.05)。　　 四、PAG活性　　 乙体氯氰菊酯染毒后2h各组小鼠脑组织PAG活性无统计学差异(P＞0.05);染毒后4h小鼠脑组织PAG活性随着染毒剂量的增加呈升高趋势,但差异无统计学意义。　　 五、PAG、GLT-1 mRNA水平　　 乙体氯氰菊酯染毒后4h各组小鼠脑组织PAG、GLT-1 mRNA水平相比无统计学差异(P＞0.05)。　　 结论：　　 80mg/kg剂量乙体氯氰菊酯一次经口染毒可使小鼠脑组织Glu水平降低,GluTs摄取能力的增强可能是该药引起Glu递质紊乱的原因之一。