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研究背景:全球癌症发病形势严峻,癌症发病率与死亡率呈持续上升趋势,其中,约一半的新增肝癌病例发生在中国,严重危害人类的生命健康。临床上对肝癌尚缺乏有效的早期诊断及治疗手段,预后很差。前列腺素E2(Prostaglandin E2,PGE2)是一种炎性介质,对肿瘤细胞的生长与侵袭能力有显著的促进作用。在肝细胞癌细胞中,PGE2与细胞膜上的四种EPR(E prostanoid receptor)结合,分别为EP1R、EP2R、EP3R和EP4R,从不同的层面影响着肝细胞癌细胞的生物学性状。本实验室前期研究工作发现肝细胞肝癌Huh-7细胞中EP3受体剪接体亚型的类型为EP3-4、EP3-5、EP3-6和EP3-7四种,但对于这四种受体亚型对肝细胞癌细胞增殖和侵袭能力的作用还不清楚。本课题在此工作基础上,进一步分析EP3-4、EP3-5、EP3-6和EP3-7四种受体对肝细胞肝癌细胞Huh-7增殖和侵袭的作用。研究目的:探讨在肝细胞肝癌Huh-7细胞中前列腺素E2 EP3各受体亚型对肿瘤细胞生长与侵袭的作用。研究方法:1、常规培养人肝细胞肝癌Huh-7细胞。2、Huh-7细胞EP3受体亚型质粒瞬时转染。3、应用RT-PCR及western blot实验检测转染细胞EP3受体各亚型的mRNA及蛋白水平。4、运用WST-8细胞增殖测定试剂检测转染后Huh-7细胞的增殖情况。5、应用划痕实验检测转染后Huh-7细胞的侵袭能力。6、应用western blot实验检测转染细胞内Erk蛋白磷酸化水平的变化。研究结果:1、转染后Huh-7细胞EP3受体表达水平明显增高。2、经10μmol/L EP3受体激动剂sulprostone处理24h后,过表达EP3-4、EP3-5和EP3-7受体亚型的细胞增殖率分别达到:126.7%、124.0%和123.8%。EP3-6受体亚型过表达细胞的增殖率与pc-DNA转染对照组相比差异无显著性。3、经10μmol/L sulprostone处理24h后,过表达EP3-4、EP3-5和EP3-7受体亚型细胞的侵袭性分别增加至:135.8%、123.5%和128.7%。EP3-6受体亚型高表达细胞的侵袭率与pc-DNA转染对照组相比无显著性差异。4、与pc-DNA转染对照组相比,EP3-4、EP3-5和EP3-7受体转染细胞内Erk磷酸化水平分别上调了:54.8%、33.4%、44.3%。EP3-6受体过表达细胞胞内Erk磷酸化水平改变不明显。结论:Huh-7肝癌细胞中,EP3-4、EP3-5及EP3-7这三种受体亚型对细胞的生长及侵袭有显著地促进作用,而EP3-6亚型则无明显的促进作用,表明EP受体间可能存在负反馈调控性的平衡机制。EP3受体促进肝癌细胞生长和侵袭的作用与Erk激活的现象一致。