论文部分内容阅读
目的:研究骨髓间充质干细胞移植(Bone marrow-derivedmesenchymal stem cells,BMSCs)联合神经营养素-3(neurotrophin-3,NT-3)对大鼠皮质脊髓束横断后神经细胞凋亡及脊髓损伤修复的影响及意义。方法:采用密度梯度离心与贴壁筛选法相结合制备大鼠骨髓间充质干细胞,选用清洁级健康Sprague-Dawley(SD)大鼠200只,体重250—300g,雌雄不限,在相当于T8椎板水平用做好标记的显微剪刀剪断脊髓的背侧2/3,建立大鼠皮质脊髓束横断损伤模型。随机分成手术对照组(n=50)、NT-3组(n=50)、BMSCs移植组(n=50)、BMSCs移植联合NT-3组(n=50)。每组中取5只,在手术前及手术后1d、1w、2w、3w及4w,采用BBB(Basso,Beattle,Bresnahan)评分评价运动功能,然后取出脊髓组织检测相对分子质量为200 000的神经中丝蛋白(neurofilaments,NF)免疫组织化学活性的变化。其余对照组及BMSCs移植组、BMSCs移植联合NT-3组、NT-3组动物于损伤后2h、4h、6h、8h、12h、1d、3d、7d和14d取出伤段脊髓,分别行RT-PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction)检测bax和bcl-xl基因表达的变化,每个时间点5只大鼠。所得数据采用组间均数比较t检验和组内方差分析,进行统计学处理。结果:1、脊髓损伤后双后肢瘫痪,BBB评分,2w、3w和4w点NT-3组、BMSCs移植组、BMSCs移植联合NT-3组移植组明显高于损伤对照组,有显著统计学差异(P<0.05);BMSCs移植联合NT-3组高于NT-3组、BMSCs移植组,有统计学差异(P<0.05);2、损伤后bax及bcl-xl基因mRNA转录水平升高,但bax基因增加更加明显;3、NT-3组、BMSCs移植组与手术对照组相比bax基因转录水平下降而bcl-xl基因转录水平升高(P<0.05);BMSCs移植联合NT-3组与NT-3组、BMSCs移植组比bax基因转录水平下降而bcl-xl基因转录水平升高明显(P<0.05)。4、NF免疫组化结果显示,BMSCs移植联合NT-3组平均灰度值明显小于其他三组,有显著统计学差异(P<0.05)。结论:(1)脊髓损伤后NF表达增加,ENT-3、BMSCs可以促进NF的表达;(2)NT-3、BMSCs可能通过影响凋亡基因bax和bcl-xl表达的变化,对脊髓损伤起保护作用及修复促进作用。(3)BMSCs移植联合NT-3可促进损伤的脊髓神经的存活和再生,并互相协同作用,较单一应用BMSCs或NT-3能更好的促进脊髓损伤修复和大鼠后肢功能恢复。