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目的:通过高脂饮食建立大鼠不同程度脂肪肝模型,进行超声直方图(Hist-B)测定,并结合生化检查,探讨具有病理基础的脂肪肝无创性超声定量诊断标准。
方法:选用雄性wister大鼠40只,正常喂养1周后,随机分成对照组15只,普通饲料喂养;实验组25只,高脂饲料喂养,两组均自由饮水。分别于4w、6w、8w、10w、12w各处死3只对照组大鼠和5只实验组大鼠。处死前隔夜禁食水,次日称重后以10%水合氯醛(3-5ml/kg)腹腔注射麻醉后,剑突下3cm上腹部脱毛,充分暴露腹部,取仰卧位固定,涂充足的藕合剂,使探头与腹壁充分接触,采用日本TOSHIBA 350A.彩色超声诊断仪进行肝脏超声检测,探头频率为3.75MHz,在相同条件下(增益为6/86,深度为6.0cm,分辨率及灵敏度固定,STC曲线调节钮至于正中一直线)利用超声直方图(Hist-B)功能固定面积测量法进行灰阶值测定,不同深度取三个测试区域,取平均灰阶值(M值)。取样框内避开可见的肝内静脉、门脉、胆管等组织。每次行超声直方图功能检测前,先用目测观察法判断是否有脂肪肝并进行分度(诊断标准参考中华医学会肝病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组.非酒精性脂肪性肝病诊疗指南[J]肝脏,2006,11(1):68-70.)。超声检测完成后,取心脏血处死,取出肝脏。肝脏称湿重后用10%甲醛溶液固定48h进行HE染色,切片后光镜下观察病理。心脏血离心后取血清,应用日本日立7170-AHITAC全自动生化分析仪检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)。统计学处理:本实验数据均以均值土标准差(mean±SD)表示,实验组各组间采用单因素方差分析,其余数据采用独立样本t检验比较,P<0.05时有统计学意义。
结果:1 病理结果显示,每只大鼠所取3处病理结果无差异。根据病理诊断标准,符合正常肝脏的大鼠15只;符合肝脏轻度脂肪变的大鼠7只;符合肝脏中度脂肪变的大鼠8只;符合肝脏重度脂肪变的大鼠10只。
2.以病理结果为标准,超声直方图平均灰阶值测定法优于肉眼观察测定法。前者敏感度88%,特异度93%,准确率90%;后者敏感度76%,特异度87%,准确率80%。
3.体重变化情况在实验过程中,大鼠体重一直保持上升,但是各组之间没有显著性差别(P>0.05)。实验组与对照组比较差异具有显著性(P<0.01)。
4 实验组与对照组超声M值及生化指标比较:实验组与对照组均有明显差异(P<0.05)。
5 各组超声M值比较:
轻度脂肪肝组(15.20±0.74)、中度脂肪肝组(24.38±2.17)、重度脂肪肝组(35.44±2.58)与正常对照组(7.99±0.65)相比,P<0.05,有明显差异。
6 超声M值与血脂比较:M值与TG、TC在对照组、轻度脂肪肝、中度脂肪肝、重度脂肪肝组都呈升高趋势,而HDL-C呈下降趋势。
7 各组肝功能比较:对照组与轻度脂肪肝组ALT、AST有明显差异(P<0.05),中度脂肪肝组、重度脂肪肝组有显著差异(P<0.01)。 8 超声M值与肝功能比较:M值、ALT、AST在对照组、轻度脂肪肝、中度脂肪肝、重度脂肪肝组都呈升高趋势。
结论:高脂饮食可以快速建立不同程度的大鼠脂肪肝模型,超声直方图能定量评价脂肪肝,且能判断肝脏脂肪浸润的程度,为脂肪肝无创性量化诊断提供了可靠依据。