中草药复合制剂对乏情母羊的治疗作用与分子检测

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本试验选取了90只连续10个月未出现发情迹象的未孕湖羊作为研究对象,并对其进行探索性治疗,分别用激素类药物、中草药制剂进行处理,同时在治疗过程的各个时期颈静脉采集其外周血液,用放射性免疫技术测定雌激素和孕酮含量,观察其内分泌生理变化。采集其耳组织块,对其DNA进行提取,并根据ESR、GDF9和BMP15的序列设计引物进行特异性扩增,然后分别用SSCP方法和RFLP方法进行分析检测。1.先以3周龄尚未性成熟的雌性昆明小鼠作为试验材料,分别用自制中药和生理盐水进行处理。经处理后,取其卵巢和子宫中段,制成石蜡切片,进行HE染色,观察其结构和组织学变化。结果表明:与对照组相比,中药处理组小鼠卵巢大卵泡数百分比增多,子宫宫腔增大,腺体增多,表明中草药制剂能增强繁殖性能。2.选取连续10个月未出现发情迹象的乏情湖羊90只,按照体重和年龄分为A、B、C和D四组,分别用催情散、促排3号、自制中药和0.9%的生理盐水处理,旨在研究中、西药对乏情羊的治疗效果。另外,采集各组湖羊的外周血液,分离血浆和冻存,测定E2和P4含量。结果显示:催情散、促排3号对乏情羊的治愈率均为50%,而自制中药的治愈率略低于前两组为43%。3.试验材料为连续10个月未出现发情迹象的湖羊90只和正常羊50只,提取基因组DNA,利用PCR-SSCP技术检测ESR基因多态性,以寻找与乏情相关的分子标记。结果发现:引物2中正常羊和乏情羊都存在CC和DD两种基因型,正常羊CC基因型个体为19只(38%),DD基因型为31只(62%),而繁殖障碍羊的CC基因型为37只(41%),DD基因型为53只(59%),差异不显著(P>0.05)。研究结果初步表明,造成乏情的原因与此基因没有直接关系。4.选取连续10个月未出现发情的湖羊作为试验对象,提取其基因组DNA,利用PCR-RFLP检测GDF9基因的FecGH和BMP15基因的FecXG和FecXB三个突变位点,以获取乏情与基因突变的关系。结果发现:三个位点均为野生型。研究结果初步表明造成乏情的原因与这几个基因突变位点没有直接关系。
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