细胞功能主要由基因表达决定,基因表达在转录,RNA 5’加帽,剪接,RNA多聚腺苷酸化和翻译每个步骤中,在时间和空间上均受到精确控制。剪接和多聚腺苷酸化的主要调控方法是通过选择不同剪接位点。可变多聚腺苷酸化是一种RNA加工机制,可在mRNA和其他RNA聚合酶Ⅱ转录本上产生不同的3’末端,因此一个基因可以产生具有不同长度3’UTR的多种mRNA或产生蛋白编码序列的不同转录本。这种机制对复杂的生物体非常重要,因为它提供了一种表达相同蛋白质但数量和位置不同的方式。大约70%的人类基因包含多个多聚腺苷酸化位点,并且多聚腺苷酸化位点广泛分布于内含子和外显子区域。在不同条件下选择不同的多聚腺苷酸化位点,这种精细控制可变多聚腺苷酸化的过程对人体的正常功能很重要,不稳定和不正确的调节会导致细胞功能紊乱和疾病。这种调节需要pre-mRNA中的各种顺式元件,大量的反式因子以及细胞核中的各种RNA聚合酶的参与,并受多种细胞微环境因素的影响。但是目前对于调节可变多聚腺苷酸化的要素,因素和机制仍然不是很清楚。在这里,我们发现了几种可变多聚腺苷酸化的增强因子序列,包括TAGCGCCA,AGAACCCG,GCGCCACA,AACTCCCA,并在 pRiG 报告系统中显示了它们对RBM12基因多聚腺苷酸化位点的作用。然后,我们对AACTCCCA基序进行了基于CRISPR/Cas9的筛选。NR2E3,MGST2和HOXC12基因在筛选的文库中显示出明显的富集。除此之外,大量研究表明,由于选择了不同的多聚腺苷酸化位点而引起的mRNA表达差异可能会影响细胞外信号应激,生长和发育以及各种疾病的发生和发展。因此,调节RNA选择多聚腺苷酸化位点的方法对于研究和治疗很重要。在这里,我们在可变多聚腺苷酸化报告基因中测试了 dCasRx阻断可变多聚腺苷酸化过程的能力。使用靶向UGUA元件的gRNA,dCasRx可以将EGFP/DsRED（1-多聚腺苷酸化位点的使用量）提高到2-3倍。但是,我们无法通过靶向AAUAAA信号的gRNA成功阻止多聚腺苷酸化,这是由于其相邻区域的GC含量低导致结合亲和力降低。我们还将dCasRx应用于正常基因组内的多聚腺苷酸化位点,并成功操纵了串联的可变多腺苷酸化（PHB,CD47,GNAI2）和最后一个外显子可变剪接（AK2,LMNA）中的可变多腺苷酸化。我们的实验提供了一种调节可变多聚腺苷酸化过程的新方法,以及一种挽救疾病的可变多聚腺苷酸化异常的方法,这些疾病有助于潜在的治疗和相关研究。除此之外,我们还通过dCasRx干扰了GNA11基因中非经典的可变多聚腺苷酸化位点的不同位点与反式因子的结合。当dCasRx结合在多聚腺苷酸化位点时,多聚腺苷酸化位点使用情况发生了重大变化。这个实验同时显示了 dCasRx应用于多聚腺苷酸化位点顺式元件筛选的潜能。