研究背景神经管缺陷有较高的发病率,我国为高发国家。脊髓脊膜膨出在神经管缺陷活产的婴儿中最为常见。临床上脊髓脊膜膨出可致截瘫、大小便失禁、脑积水、性功能障碍、骨骼畸形和精神损害等严重后果。维甲酸可诱导SD孕鼠产生脊髓脊膜膨出畸形胎鼠,可模拟出人类神经管闭合障碍的不同程度的病变,是研究人类脊髓脊膜膨出的良好模型。脊髓脊膜膨出致脊髓损伤,是先天性神经源性膀胱的主要病因。以往针对脊髓脊膜膨出胚胎神经损害的研究相对较少,脊髓损伤的相关实验主要采用手术的方法横断脊髓,并且发现在此种模型脊髓受损后,脊髓中HGF/C-Met等细胞因子表达发生变化；深入研究提示,这些细胞因子表达的变化对脊髓损伤后的修复有一定作用。维甲酸诱导脊髓脊膜膨出胎鼠模型导致脊髓损伤相关研究未见报道。本实验利用维甲酸诱导胎鼠脊髓脊膜膨出模型,研究脊髓相关细胞因子的表达情况,以期为将来脊髓脊膜膨出的胎内治疗提供研究基础。目的对不同损伤程度的MMC胎鼠脊髓HGF、C-Met等细胞因子的mRNA进行Real Time-PCR荧光定量检测,了解各指标在不同组别RNA水平上的变化及其相互关系。材料与方法本实验设计方案得到了复旦大学临床药理基地委员会及儿科专业组伦理委员会批复。(批复书见附页)SD大鼠在孕10天9a.m.左右灌胃。实验组孕鼠灌喂全反式维甲酸剂量为60mg/kg,溶于2m1橄榄油制成乳浊液。对照组SD孕鼠仅灌喂2m1橄榄油。在胚胎16,18,20天(E16,E18,E20)分别剖腹产取出并解剖所有胎鼠,依据骶尾部皮肤及椎板椎弓闭合情况将胎鼠分为显性脊髓脊膜膨出组(MMC显性组)、隐性脊髓脊膜膨出组(MMC隐性组)及未出现明显异常组(MMC正常组)。共12小组,每组胎鼠数量为3-6只。对各组脊髓脊膜膨出胎鼠脊髓HGF等细胞因子进行Real Time-PCR检测：解剖显微镜下分离胎鼠标本脊柱,显微镊子拆除背侧脊椎,取出包括膨出部分的腰骶部脊髓。抽提RNA,对肝细胞生长因子(HGF)及受体C-Met和纤溶酶原激活物tPA和uPA以及内参基因β-actin进行逆转录和PCR扩增。获得的数据采用SPSS17.0软件进行统计分析,对分组资料(对照组和实验组)采用power(2,-ΔΔct)处理数据；多组间比较进行ANOVA检验方差齐性,LSD统计分析(以P值≤0.05为有统计学意义)。结果：1.实验组19只孕鼠接受维甲酸灌胃,胚胎总数176只,其中MMC显性胎鼠53只(30.1%),MMC隐性胎鼠10只(5.7%),MMC正常胎鼠87只(49.4%),伴发其他畸形胎鼠7只(4.0%),死胎吸收胎19只(10.8%)。对照组孕鼠4只,获得胎鼠共55只,均无明显外观异常。2.HGF在MMC显性组表达较其余三组增高,且随时间表达有明显增高趋势；HGF在MMC隐性组表达在E18、E20天高于MMC正常组和对照组；HGF在MMC正常组与对照组表达无明显差异；HGF在MMC隐性组、MMC正常组及对照组均随时间表达无明显差异。3.C-Met在MMC显性组表达较其余三组表达增高,且随时间有明显增高趋势；C-Met在MMC隐性组、MMC正常组及对照组在E16、E18天表达无明显差异,在E20天表达前两组高于对照组；C-Met在对照组随时间无明显增高趋势,在MMC隐性组及MMC正常组在E20天表达明显增高。4.bPA在MMC显性组与隐性组表达无明显差异；在MMC正常组与对照组表达无明显差异；在E18、E20天MMC显性组与隐性组表达高于其余两组；tPA在各组随时间均无明显变化。5.u-PA在MMC显性组在E18、E20天表达较其余三组表达增高,且随时间有明显增高趋势；u-PA在MMC隐性组在E18、E20天表达较MMC正常组和对照组表达增高,且随时间有明显增高趋势；u-PA在MMC正常组与对照组表达一致,且随时间无明显变化。结论：1.孕10天60mg/kg维甲酸灌胃SD孕鼠,可产生不同损伤程度的神经管闭合不全胎鼠,包括MMC显性胎鼠、MMC隐性胎鼠及无明显畸形的胎鼠,也有一定比例伴发其他畸形的胎鼠及死胎吸收胎。MMC显性胎鼠比例为30.1%,MMC隐性胎鼠比例很低为5.7%。2.MMC显性组胎鼠脊髓中,HGF及其受体C-Met, uPA及tPA的表达与对照组比较有差异,均高于对照组的表达。3.HGF及其受体C-Met, uPA表达在MMC显性组高于隐性组,可能为这些细胞因子的表达与神经管闭合异常及脊髓暴露于羊水中有关。