为了了解光对色素细胞色素颗粒运动的影响机制，本试验以红剑鳞片上的红色素细胞为材料，通过体外培养和显微镜下观察其在不同波长下的反应，再结合药理学手段进行研究。 首先，本试验建立了红剑(Xiphophorushelleri)红色素细胞的分离和培养方法。采用消化液消化红剑鳞片组织的方法分离红色素细胞，按2-5×104个／mi的接种密度用24孔或96孔培养板培养，通过换液的方法纯化红色素细胞。其次，采用LeibovitzL-15培养红色素细胞，并对培养2-6d的红色素细胞对不同波长的光的反应进行观察。最后，研究红剑红色素细胞色素颗粒对光的应答反应的信号通路。采用了无钙镁K+溶液，钙离子通道阻断剂D-600、百日咳毒素、PKC抑制剂星孢素和PKC抑制剂H-7、钙／钙调蛋白阻断剂W-7、腺苷酸环化酶激活剂FSK、cAMP-PDE抑制剂茶碱、PKA抑制剂H-89和cAMP类似物8-Br-cAMP等一系列的试剂进行药理学试验。 结果表明： 1)25℃下，采用含0．25％胰蛋白酶、0．06％胶原酶II、0．05％透明质酸酶和2％的牛血清白蛋白的CMF—PBS联合消化鳞片30min可获得高活力和较高纯度的红色素细胞。在25℃无C02环境下，用含lO％胎牛血清、100U／ml青霉素和100ug／ml链霉素的LeibovitzL．15培养的红色素细胞生长良好。红色素细胞培养1d有3040％细胞贴壁，培养2d有70一80％贴壁。培养中的红色素细胞色素分散程度不一。 2)黑暗、可见光、WB、WG和WU对色素颗粒运动都有影响。黑暗下红色素细胞多表现色素聚集，在光照下表现色素分散。WB可使大部分红色素细胞色素聚集，而WG则令多数红色素细胞色素分散，且长时间的WG作用会令色素细胞颜色变浅。WU会使红色素细胞剧烈收缩，可达100％收缩，色素聚集于细胞中心。长时间的WU作用可导致细胞伪足断裂。 3)通过一系列的药理学试验，表明高浓度的K+和Ca2+通道的抑制剂D-600可加快红色素细胞内的色素颗粒聚集反应，这提示细胞膜的势能变化可影响色素颗粒的运动，细胞膜的去极化令色素颗粒聚集。FSK和茶碱可抑制色素聚集反应，H-89可抑制色素的分散反应，8-Br-cAMP可有利于色素分散反应，这表明色素颗粒运动反应与细胞内cAMP水平有关，低水平的cAMP有利于色素颗粒的聚集，高水平的cAMP有利于色素颗粒分散。星孢素和H-7不影响WU引起的色素聚集反应，因而提示DAG通路不参与色素颗粒的聚集反应。而IP3的抑制剂W-7则可使色素颗粒聚集反应加快，提示双信使通路中的IP3通路可抑制色素颗粒的聚集反应。用百日咳毒素处理后的红色素细胞在WU作用下无法诱发正常的色素颗粒聚集反应，表明红色素细胞的色素颗粒的聚集是通过与Gi／Go／Gt蛋白的偶连作用，从而通过降低细胞内~AIVIP水平实现。 以上结果提示，光对红色素细胞的色素颗粒运动的影响可能是通过cAlV[P路径和IP3路径的共同作用。