一种递送基因的非病毒载体纳米颗粒的研制

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目的:制备一种可用于基因递送的非病毒载体--壳聚糖载基因纳米颗粒,并对其理化性质和体外转染活性进行了研究,评价其应用于基因递送的非病毒载体系统的可行性。 方法:通过聚合物分散法制备出壳聚糖空载纳米粒后,用绿色荧光蛋白(PEGFP-C1)质粒做报告基因,以静电吸附的方式将PEGFP-C1质粒DNA和壳聚糖结合形成壳聚糖载基因纳米粒,再用不同浓度的MSS-PEG对纳米颗粒进行修饰,用扫描电镜和原子力显微镜观察其修饰前后的形态变化,激光粒度分析仪测定其粒度分布、表面电位(Zeta电位),MTT试验检测壳聚糖纳米载体HepG2和COS7的细胞毒作用,DNase Ⅰ保护实验研究DNA一壳聚糖纳米颗粒对所携带基因的保护作用,用体外基因转染实验定性评价纳米粒的转染活性,用倒置荧光显微镜观察和流式细胞仪测定转染结果。通过考察递送不同剂量的基因,寻找本递送系统较好的转染条件。 结论:壳聚糖纳米粒能将基因递送到细胞内,并使报告基因在细胞内表达。因此,壳聚糖载基因纳米颗粒可以用作基因递送的非病毒载体系统,值得进一步研究。
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