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目的：
通过Gateway技术结合酶切连接的方法，将ECFP基因、CYFP基因与人SUMO基因连接起来形成ECFP-SUMO-EYFP融合基因，并将此基因在大肠杆菌BL21中表达，为进一步的荧光共振能量转移研究打下实验基础。
方法：
1.通过PCR技术将ECFP基因扩增出来，并通过两步法PCR反应和BP反应将ECFP基因片段克隆到到质粒pDeliver02，构建入门克隆ECFP Dev02，并经过提取质粒、经酶切鉴定，并测序确定。
2.通过PCR技术将EYFP基因扩增出来，并通过两步法PCR反应和BP反应将EYFP基因片段克隆到到质粒pDeliver01，构建入门克隆EYFP Dev01，并经过提取质粒、经酶切鉴定，并测序确定。再通过酶切、连接和RJ反应，将EYFP基因克隆到表达载体pReceiver-B01.1中，构建表达载体EYFP B01.1。
3.构建融合基因：PCR扩增SUMO1，SUMO2，SUMO3基因，通过酶切、连接，与EYFP B01.1构建融合的SUMO1-EYFP B01.1，SUMO2-EYFP B01.1，SUMO3-EYFP B01.1表达载体；PCR扩增ECFP基因，纯化该基因，通过酶切、连接，分别与SUMO1-EYFP B01.1，SUMO2-EYFP B01.1，SUMO3-EYFPB01.1构建ECFP-SUMO1-EYFP B01.1， ECFP-SUMO2-EYFP B01.1，ECFP-SUMO3-EYFP B01.1融合基因表达载体。
4.融合基因ECFP-SUMO1-EYFP，ECFP-SUMO2-EYFP，ECFP-SUMO3-EYFP分别在大肠杆菌BL21中表达并纯化，通过用SDS-PAGE鉴定融合基因，并通过Ni-NTA离子交换柱层析纯化，最终得到纯化后的融合蛋白，并以酶切实验初步分析了SENP相对于底物ECFP-SUMO-EYFP的酶切特异性。
结果：
1.成功的构建入门克隆ECFP Dev02和EYFP Dev01，成功构建表达载体EYFPB01.1。
2.成功的构建融合基因ECFP-SUMOs-EYFP，并同时构建SUMOs三种亚型的融合基因。
3.ECFP-SUMO-EYFP蛋白在大肠杆菌BL21获得可溶性表达，SDS-PAGE分析表明表达产物分子质量(Mr)与预期相符，ULP、SENPs对底物ECFP-SUMOs-EYFP的酶切特异性检测表明ECFP-SUMOs-EYFP可被有效酶切用于荧光共振能量转移底物。
结论：
利用pReceiver-B01.1表达载体表达ECFP-SUMO-EYFP蛋白，为进一步的荧光共振能量转移研究打下了实验基础。