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目的： 2 型糖尿病患者中有 40~50%合并脂代谢异常。有资料表明胰岛素抵抗和/或 2 型糖尿病患者普遍存在血清游离脂肪酸（free fatty acids,FFAs）水平升高，而且成为糖耐量减低（IGT）的独立危险标志。目前大多数学者认为糖尿病血管病变与内皮功能受损密切相关。研究发现糖尿病患者存在内皮依赖性的血管舒张（EDVR）减弱，而这种异常变化在糖尿病血管病变中起了重要作用。以内皮素（ET-1）为代表的内皮源血管收缩因子（endothelium-derived contractingfactor ,EDCF）与一氧化氮（NO）为代表的内皮源血管舒张因子（endothelium-derived relaxing factor ,EDRF）的分泌和调节功能平衡失调，是内皮功能异常和内皮细胞损伤的重要特征。有资料及我们前期的研究工作已经表明 2 型糖尿病病人存在明显的 FFAs 升高。在体外人脐静脉血管内皮细胞的培养实验中证实，不同浓度 FFA 可影响内皮细胞 NO 和 ET-1的释放。本研究旨在用不同种类及不同浓度的游离脂肪酸对离体培养人血管内皮细胞eNOSmRNA和ET-1mRNA表达水平的影响，以了解 FFA 使血管内皮细胞 NO 和 ET-1 分泌异常的调节水平，探讨高血清 FFAs 浓度的糖尿病患者合并大血管病变的可能机制，并且为早期恢复内皮细胞生理功能和防治心血管疾病开拓新思路 方法：所用的细胞为人脐静脉内皮细胞株 ECV304，培 1<WP=4>中 文 摘 要养基采用 M199 培养基（含 20%胎牛血清，青霉素，链霉素，L-谷氨酰胺），在 5%CO2 细胞培养箱中 370C 孵育培养。将游离脂肪酸分别配制成游离脂肪酸/0.1NNaOH 溶液，用超生乳化法充分溶解。每 5ml 培养基中分别加入已配置好的200uml/mlＦＦＡ溶液 2.5ul,5ul,10ul,15ul 以配制成ＦＦＡ浓度分别为100umol/L,200uml/L,400umol/L,600umol/L的2０％胎牛血清的Ｍ１９９培养基。应用含相应体积 0.1NNaOH 溶液的培养基培养的细胞组作为对照组 F 组。实验组按照给予脂肪酸种类不同分为Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ组，各组分别给予不同浓度的脂肪酸，置于 5%CO2 细胞培养箱中 370C 孵育培养 24 小时。用 TRIZOL 试剂进行细胞总ＲＮＡ的提取。经过完整性和纯度的检测附和要求后，进行 RT-PCR 反应。扩增产物混合溴酚蓝加样于 1%的琼脂糖凝胶中电泳，以凝胶成像分析仪分析各个 DNA 条带灰度值，并进行拍照。各个反应体系以 GAPDHmRNA 的 RT-PCR 产物为内参照，计算待定 mRNA 的 RT-PCR 产物与其灰度比值，作为 mRNA 的表达值。用 SＡS 统计软件进行统计学处理，以分析实验结果。 结 果：当 C18：1 组、C18：2 组 FFA 浓度等于或高于200umol/L 时， eNOSmRNA 表达减低。其他各组 C16：0、C18：0、C24：0 组与对照相比较，无显著差异（P<0.05）。C18：1 组各浓度分别与 C18：2 组各浓度 FFA 情况下的eNOSmRNA 表达情况相比较，后者的抑制作用更显著（P<0.05）。C18：1 组目的基因灰度比平均值随浓度增加依次降低（P<0.05）。 C18：2 各浓度组间比较，随着 FFA 浓度增加，eNOSmRNA 表达水平减低。C18：1 组以及 C18：2 2<WP=5>中 文 摘 要组各浓度 FFA 条件下，ET-1mRNA 表达水平减低，与对照组相比差异有显著性（P<0.05）。C16：0、C18：0、C24：0 组，FFA 浓度为 200umol/L 以及高于此浓度条件下，ET-1mRNA表达水平增高，与对照组相比较差异有显著性（P<0.05）。C18：1 组与 C18：2 组各个浓度 FFA 条件下 ET-1mRNA 表达随 FFA 浓度的增高而减低，差异有显著性（P<0.05）。C24：0、C16：0 各浓度组显示，ET-1mRNA 表达随此 FFA 浓度的增高而增强，差异有显著性（P<0.05）。将含有 18 个碳原子的 C18：0、C18：1、C18：2 各组相同 FFA 水平相比较，ET-1mRNA 表达水平依次降低（P<0.05）。关于不同 FFA 作用于血管内皮细胞对其 eNOSmRNA 扩增产物电泳条带灰度/ET-1mRNA 扩增产物电泳条带灰度的比值： C18：1、C18：2 组各个浓度 FFA 条件下，所测得两个目的基因扩增产物电泳条带灰度比值高于对照组，差异有显著性（P<0.05）。C16：0、C18：0、C24：0 各组各个浓度 FFA 条件下，所测得两个目的基因扩增产物电泳条带灰度比值低于对照组，差异有显著性（P<0.05）。 将 C18：0、C18：1、C18：2 各组同浓度FFA 条件下两个目的基因扩增产物电泳条带灰度比值进行比较，可见比值依次升高有显著意义（P<0.05）。比较 C16：0、C18：0、C24：0 各组同浓度 FFA 条件下两个目的基因扩增产物电泳条带灰度比值，未发现显著差异（P>0.05）。 结论：1. FFAs 对内皮细胞 eNOS mRNA 表达水平的影响与脂肪链 长度无关。2. 不饱和脂肪酸降低 eNOS mRNA 表达水平，对 ET-1mRNA 表达具有抑制作用；两种抑制作用相比较，前者强于后者， 3<WP=6>中 文 摘 要 提示不饱和脂肪酸倾向于维护血管舒张功能。3. 不饱和脂肪酸对eNOS mRNA表达水平的抑制造成NO 合 成的抑制，具体作用有待进一步探讨。4. 饱和脂肪酸呈浓度依赖性促进 ET-1