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流感是威胁人类健康的常见传染病之一,主要由流感病毒导致。疫苗接种是目前流感防治的有效方法。流感病毒感染或疫苗接种后,能诱导机体产生郎向流感病毒抗原的抗体,其中起中和作用的主要是抗血凝素(HA)抗体。流感病毒HA抗原由头部和茎部构成,病毒抗原簇主要集中在头部。疫苗接种诱导产生的抗体大多针对HA头部,对抗原近似的病毒具有反应性,但HA头部易发生抗原漂移,因而每年需要更新疫苗姐分。近年来人们分离获得越来越多的针对HA茎部的广谱中和抗体,送类抗体通过抑剌病毒与内吞体膜的融合或者抑制HA裂解而发挥中和作用。由于HA茎部氨基酸相似性在不同亚型流感病毒中相对较高,抗HA茎部中和抗体具有较广的抗病毒谱,可抑制不同亚型甚至不同组(Group)流感病毒感染。疫苗接种能否诱导抗HA茎部抗体及血清中这类抗体的含量尚不清楚。本课题检测了季节性流感疫苗及2009pdmHlNl疫苗接种的中国人群血清中抗HA茎部抗体水平(免前0天和免后21天)。首先使用A/Bri油ane/59/2007(HlNl)-HA或A/Califomia/04/2009(HlW)-HA抗原,应用间接ELISA测定血清抗体对所接种的同源抗原的反应,再使用A/Anhui/1/2005(H5N1)-HA测定血清抗体对不同亚型HA的交叉反应性。由于抗HA茎部抗体在血清中的含量极低且血清中还可能存在造成非特异性结合的其它物质,我们用protein A进行血清纯化,之后的实验均使用纯化后血清测试。对HA交叉结合性抗体水平明显增高的样本W含嵌合姐5/1(由A/Shenzhen/1/2011(H5N1)HA头部和A/PuertoRico/8/1934(Hl饥)HA茎部构成)的CH5N1(SZ)假病毒测定血清抗体中和功能。再WcH5/l(QH)(含CH5/1(QH)HA,即由A/Bar-headed Goose/Qinghai/1/05巧5饥)头部和A/PuertoRico/8/1934(Hl饥)茎部构成,反向遗传捶救获得的重组病毒)、A/Brisbane/59/2007(HlNl)、A/Califomia/07/2009(H1W)进行HI试验和W生物素标记的己知班向Groupl HA茎部的中和抗体CR6261,通过竞争性ELISA检测,明确了血清抗体的识别表位。本研究获得以下主要结果:一、季节性流感疫苗免疫人群血清中抗HA茎部广谱中和抗体水平1、49个季节性流感疫苗受试者中,17人血清(34.79%,17/49)同CA04-HA有交叉反应,其中有11人(64.71%,11/17)血清也能同AH1-HA(H5)反应。2、17份交叉反应的血清中7份在免后21天对CH5N1(SZ)pps具有交叉反应中和活性;3人免前血清中可检测到抗HA茎部的CR6261类似抗体;疫苗接种后,均能检测到CR6261类似抗体,且该类抗体水平明显増高,占总IgG(约lOmg/mL)的比例为0.007%-0.017%。3、值得注意的是,尽管一聲受试者的血清对同源性疫苗株HA头部呈低反应性或者无反应,但是它们具有不同程度的抗HA茎部抗体应答或交叉中和抗体活性,因此在疫苗有效性评价时需要考虑引入交叉反应性抗体检测。二、2009 pdmH1N1疫苗接种人群血清中抗HA茎部广谱中和抗体水平1、51个2009 pdmH1N1疫苗接种者中,有30人(58.82%,30/51)免后21天血清对AH1-HA(H5)结合性抗体水平明显增高；该异源亚型HA结合性抗体水平增高与疫苗接种相关。2、30人中,2人免前血清对cH5N1(SZ)pps有中和活性,免后有16人可检测到这类交叉反应中和抗体。疫苗接种前,62.5%(10/16)的受试者血清中可检测到CR6261类似抗体；免后21天,16人均能检测到CR6261类似抗体,占血清总IgG的0.002%-0.037%,且这类抗体的升高同疫苗接种及中和抗体滴度升高密切相关。结论季节性流感疫苗和2009pdmH1N1疫苗均可以诱导机体产生针对HA茎部的广谱中和抗体,且在免疫后CR6261类似抗体占总IgG的比例相差不大,分别为0.007%-0.017%和0.002%-0.037%。