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双酚A(Bisphenol A,BPA)是一种具有代表性的环境内分泌干扰物,广泛用于生产聚碳酸脂、环氧树脂等材料,如罐头内涂层、食品包装材料、饮料容器、婴儿奶瓶、水瓶和牙齿封闭剂等。磨损老化、高温、强酸、强碱都可加速BPA酯键的水解而释放出BPA单体。随着这些物品的广泛使用及降解,BPA在环境中的排放量急剧增加,它已经成为人类不可避免的一种环境污染物。许多国家人群的血清或尿液中BPA的检出率均在90％以上。 作为一种环境雌激素干扰物,BPA进入人体后主要通过模拟或干扰体内雌激素的合成、分泌、转运、结合和排泄,从而干扰雌激素正常的生理功能。美国国家毒理学会规划处研究发现,由于育龄期女性体内BPA含量明显高于男性,且BPA很容易通过胎盘和乳汁传递给胎儿和婴儿,婴幼儿血清中BPA水平可达到成年人的5～10倍,可能会对胎儿和婴幼儿的脑发育产生不良影响,在儿童和青少年时期出现精神、行为和智力异常。 近年来,雌激素对非生殖功能,如认知、情绪等的调节,尤其是与学习记忆的关系越来越受到人们的关注。雌激素主要通过雌激素受体(Estrogen Receptor,ER)调节脑发育、突触可塑性及学习和记忆等脑的高级功能。研究证实,BPA可通过调控细胞色素P450芳香化酶(Cytochrome P450 aromatase,CYP)的表达和活性来改变脑内雌激素的合成,而雌激素水平的变化又可调节不同脑区两种雌激素受体:ERα和ERβ的表达水平,因此雌激素的两种效应机制——经典的雌激素核受体机制和非基因组细胞信号系统均参与BPA对脑学习与记忆功能的影响。 因此,本研究采用去卵巢大鼠模型和假手术大鼠模型,观察低剂量BPA对雌性大鼠的学习记忆能力的影响及其与雌激素水平之间的关系,为进一步了解BPA的神经毒作用机制提供科学依据。 第一部分：低剂量BPA对雌性大鼠子宫的影响 目的:研究低剂量BPA对雌性大鼠子宫的影响。 方法:SD雌性大鼠80只,随机分为四组:去卵巢BPA组、去卵巢对照组、假手术BPA组和假手术对照组,每组20只。术后2周,去卵巢BPA组和假手术BPA组大鼠,每日腹腔注射50μg/kgBPA,去卵巢对照组和假手术对照组,每日腹腔注射相同剂量的花生油,连续4周。观察大鼠染毒后的毒性表现,并计算子宫系数。 结果:(1)染毒期间,各组大鼠均未见明显中毒症状,体重随染毒天数逐渐增加,各组间差异无统计学意义(p>0.05)。(2)与假手术对照组相比,去卵巢BPA组、去卵巢对照组和假手术BPA组大鼠的子宫系数明显降低,差异有统计学意义(p<0.01);与去卵巢对照组相比,去卵巢BPA组大鼠的子宫系数明显升高,差异有统计学意义(p<0.01)。 结论:低剂量BPA对去卵巢大鼠的子宫表现出一定的类雌激素活性,但对假手术大鼠的子宫表现出一定的抗雌激素活性,提示低剂量BPA的效应可能与内源性雌激素的水平有关。 第二部分：低剂量BPA对雌性大鼠学习记忆能力的影响 目的:研究低剂量BPA对雌性大鼠学习记忆能力的影响。 方法:Morris水迷宫试验检测大鼠的学习记忆能力。 结果:①在隐蔽平台试验中,与假手术对照组相比,去卵巢对照组、去卵巢BPA组和假手术BPA组的潜伏期明显延长,游泳路程增加,差异具有统计学意义(p<0.05)②在空间探索试验中,去卵巢BPA组的大鼠空间记忆保留时间较去卵巢对照组短(p<0.05)③在可视平台试验中,与假手术对照组相比,各实验组大鼠的逃避潜伏期和游泳路程,差异均无统计学意义(p>0.05)。 结论:去除卵巢后,雌性大鼠的学习记忆能力明显下降;低剂量BPA可以损伤假手术大鼠的学习能力和去卵巢大鼠的记忆能力,提示低剂量BPA的神经毒效应可能与内源性雌激素水平有关。 第三部分：低剂量BPA对雌性大鼠血清雌二醇和睾酮含量的影响 目的:研究低剂量BPA对雌性大鼠血清雌二醇(E2)和睾酮(T)含量的影响。 方法:ELISA法检测血清E2和T的含量。 结果:(1)与假手术对照组相比,去卵巢对照组和假手术BPA组的E2水平明显降低;与去卵巢对照组相比,去卵巢BPA组的E2水平明显升高;与假手术BPA组相比,去卵巢BPA组的E2水平明显升高,差异均有统计学意义(p<0.05)(2)各组雌性大鼠血清T水平未见明显差异(p>0.05)。 结论:低剂量BPA可降低假手术雌性大鼠血清E2水平,表现出抗雌激素活性;低剂量BPA可明显改善去卵巢雌性大鼠的E2水平,表现出典型的雌激素效应。未见低剂量BPA对T有明显影响。 第四部分：低剂量BPA对雌性大鼠脑组织中芳香化酶表达的影响 目的:研究低剂量BPA对雌性大鼠脑组织CYP表达的影响。 方法:Westernblot法检测CYP的表达,HE染色法观察脑组织的形态变化。 结果:(1)海马:与假手术对照组相比,去卵巢对照组海马CYP的表达明显下降(p<0.05);与去卵巢对照组相比,去卵巢BPA组大鼠海马CYP表达明显升高,差异具有统计学意义(p<0.05)(2)下丘脑:与假手术对照组相比,去卵巢对照组大鼠下丘脑中CYP的表达明显下降,差异具有统计学意义(p<0.05);与去卵巢对照组相比,去卵巢BPA组、假手术BPA组大鼠下丘脑CYP的表达明显升高,差异具有统计学意义(p<0.05)(3)去卵巢后,未发现大鼠海马和下丘脑组织病理学变化。 结论:雌性大鼠去卵巢后,其海马和下丘脑CYP表达均明显降低,而低剂量BPA可明显上调去卵巢大鼠海马和下丘脑CYP的表达。