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髓鞘是神经系统正常行使功能所必需的成分,它是神经冲动跳跃式传导的结构基础,并对于轴突完整性的维持起到重要作用。中枢髓鞘由少突胶质细胞突起的细胞膜包裹轴突而成,后者是由少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPC)发育而来。OPC在发育期经过增殖,迁移,分化等发育阶段,最后包绕轴突并形成髓鞘。人类存在很多与髓鞘病变相关的神经疾病,包括多发性硬化(multiple sclerosis,MS),新生儿脑室白质软化(periventricular leukomalacia,PVL),脊髓损伤(spinal cord injury,SCI),阿尔兹海默氏病等。这些疾病共同的病理改变是都有髓鞘的损伤丢失,且目前尚无有效的临床治疗手段。如何有效修复已有的髓鞘损伤和积极预防新的髓鞘损伤是应对此类疾病的基本策略。
高剂量糖皮质激素(glucocorticoid,GC)是目前临床上治疗MS的首选方案,后者是一种以中枢髓鞘受到自身免疫攻击而发生广泛弥散性脱髓鞘改变为特征的疾病。虽然高剂量糖皮质激素对MS急性发作期的症状缓解具有显著作用,以致成为临床治疗的金标准,但它对疾病的最终发展却影响甚微,并且其控制发作期症状的确切作用机制也尚未完全清楚。一般认为,糖皮质激素依靠其强大的抗炎和免疫抑制作用,可以减少免疫系统对髓鞘的攻击,但糖皮质激素对髓鞘再生过程以及非免疫介导的脱髓鞘是否有直接的调节作用,尚有待阐明。
肾上腺是内源性糖皮质激素的分泌器官,有报道提示小鼠的肾上腺重量与体重的比值大小与其对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的敏感性具有密切关系。为了深入研究内源性糖皮质激素在脱髓鞘疾病中的作用及其机制,本研究采用铜腙诱导的毒性非免疫性脱髓鞘模型,结合双侧肾上腺摘除手术(adrenalectomy,ADX),探讨了内源性皮质酮在脱髓鞘与再髓鞘化中的作用。
本研究的主要结果如下:
1、ADX小鼠的脱髓鞘过程加快。通过LFB-PAS染色观察胼胝体处髓鞘化水平和免疫组织化学染色方法检测髓鞘基础蛋白(myelin basic protein,MBP)表达的变化,以及电镜直接观察髓鞘包绕水平。我们发现ADX小鼠在给予铜腙第3周时胼胝体髓鞘几乎完全脱失,而对照此时仅有少量脱失,表明小鼠在缺乏内源性GC的条件下对铜腙诱导脱髓鞘易感性显著增加,提示内源性GC对髓鞘结构的稳定具有保护作用。
2、ADX小鼠的髓鞘再生过程受到阻滞。通过LFB-PAS染色观察胼胝体处髓鞘化水平、免疫组织化学染色检测MBP表达的变化,以及电镜直接观察髓鞘包绕水平,我们发现ADX小鼠在给予铜腙后第10周时髓鞘恢复不甚理想,而对照此时基本恢复完全。这一结果表明,小鼠在缺乏内源性GC的条件下,在铜腙诱导脱锈鞘后的自发再髓鞘能力有所下降,提示内源性GC对髓鞘再生具有促进作用。
3、ADX小鼠在脱髓鞘过程中成熟少突胶质细胞的数量显著减少、激活的小胶质细胞和星型胶质细胞的数量显著增多。通过免疫组织化学染色检测了成熟的少突胶质细胞、小胶质细胞和星型胶质细胞,我们发现与对照组相比,ADX小鼠在给予铜腙第3周时髓鞘脱失严重的同时成熟少突胶质细胞减少,小胶质细胞和星型胶质细胞的激活水平升高。这一结果提示在铜腙诱导的脱髓鞘过程中内源性GC对成熟少突胶质细胞具有保护作用,并且对小胶质细胞和星型胶质细胞具有抑制作用。
4、ADX小鼠在髓鞘再生过程中成熟少突胶质细胞的数量显著减少。通过免疫组织化学染色检测成熟少突胶质细胞和OPC,我们发现与对照组相比,ADX小鼠在给予铜腙后第10周时成熟少突胶质细胞数量显著减少而OPC没有明显差异,提示内源性GC对少突胶质细胞具有保护作用,并对OPC分化可能具有促进作用。进一步的体外实验也说明内源性GC对OPC分化具有促进作用。
5、ADX对小鼠在给予铜腙后胼胝体处细胞因子表达的影响。我们借助real-time PCR方法量化一些细胞因子的表达,发现ADX小鼠在给予铜腙后第10周时TNF-α表达水平显著升高,但是生长因子IGF-1和神经营养因子BDNF基因表达水平没有变化,提示内源性GC对胼胝体处促炎细胞因子TNF-α基因表达可能具有抑制作用。
6、ADX后给予皮质酮替代疗法可抵消ADX加速脱髓鞘以及阻滞髓鞘再生的作用。通过免疫组织化学染色检测MBP表达的变化,我们发现与ADX相比,给予1mg/kg和10mg/kg皮质酮替代疗法后的小鼠在给予铜腙三周时胼胝体髓鞘脱失较空白对照明显减少,髓鞘化水平接近假手术组,而在给予铜腙后第10周时髓鞘恢复程度高于空白对照,髓鞘化水平接近假手术组,说明皮质酮可以抵消ADX在脱髓鞘和髓鞘再生中的作用,提示内源性GC对髓鞘具有保护作用,对髓鞘再生具有促进作用。
以上的研究结果表明,内源性的糖皮质激素对于正常髓鞘结构的稳定具有重要作用,对脱髓鞘后的再髓鞘化也具有重要促进作用。