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目的:三邻甲苯磷酸酯(TOCP)是三甲苯磷酸酯(TCP)的3种异构体之一,普遍用在工业上及日常生活上。其除了可以引起机体出现神经毒性症状之外,还可导致生殖毒性。本课题主要通过观察TOCP对体外培养的小鼠睾丸间质TM3细胞的影响,探究氧化应激在TOCP诱导小鼠睾丸间质细胞毒性中的作用及调节机制。方法:MTT法分别检测TOCP和H2O2对小鼠睾丸间质细胞活性的影响;ELISA法检测TOCP对小鼠睾丸间质细胞内睾酮含量的影响;分别用RT-PCR和流式细胞仪检测TOCP对小鼠睾丸间质细胞周期的影响;分别用Annexin V-FITC/PI双染色法以及Hoechst染色法检测TOCP对小鼠睾丸间质细胞凋亡的影响;分别用Western blot法和电镜检测TOCP和H2O2对小鼠睾丸间质细胞自噬的影响;用活性氧试剂检测盒分别检测TOCP对小鼠睾丸间质细胞氧化应激的影响。结果:用不同浓度的TOCP(0,0.125,0.25,0.5 m M)作用于小鼠睾丸间质细胞TM348 h,小鼠睾丸间质细胞活性显著下降(P<0.05),其睾酮含量也显著下降(P<0.05);但细胞周期和凋亡并无明显影响;Western blot结果显示,细胞内自噬蛋白LC3-II/LC3-I的比例明显增加,Atg5和Beclin1的蛋白表达量也显著增加;电镜结果显示,0.5 mM TOCP可显著增加TM3细胞质内自噬小泡的数量;这些结果提示,TOCP可诱导小鼠睾丸间质TM3细胞自噬。在用不同浓度的TOCP(0,0.125,0.25,0.5 m M)处理小鼠睾丸间质TM3细胞48 h后,小鼠睾丸间质细胞内MDA的含量显著增加(P<0.05),而SOD、GSH和GSH-PX活性显著下降(P<0.05),提示TOCP可诱导小鼠睾丸间质TM3细胞氧化应激。用不同浓度的H2O2(0,100,200μM)作用于小鼠睾丸间质细胞48 h后,TM3细胞活性显著下降,细胞自噬显著增加,提示氧化应激可诱导TM3细胞自噬。而氧化应激抑制剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)可缓解TOCP对TM3细胞活性的抑制及自噬的诱导。结论:TOCP可抑制小鼠睾丸间质TM3细胞活性并诱导其自噬,但对其细胞周期和凋亡无明显影响;TOCP可诱导小鼠睾丸间质TM3细胞氧化应激;TOCP通过氧化应激诱导小鼠睾丸间质TM3细胞自噬。