蛋白质的磷酸化与去磷酸化是细胞内普遍存在的一种共价修饰方式，它几乎涉及所有的生理及病理过程，如代谢、细胞的生长发育、癌变等。揭示蛋白质磷酸化修饰发生规律是理解生物体复杂多样的生物进程的一个重要前提。由于磷酸化蛋白质在样本中含量低且动态范围广，这些特点决定了其相关研究的挑战性。本文建立了在双向电泳分离的基础上采用荧光染色的方法对磷酸化蛋白质进行检测的方法，与总蛋白显色方法相配合可同时展示出胶上的磷酸化蛋白质谱和总蛋白质谱，通过比较其相对丰度，观测蛋白质的磷酸化修饰程度。 论文对Pro-Q Diamond染色方法的灵敏度、特异性、线性范围进行了考察，确立了该方法可用于磷酸化蛋白质的定性及相对定量分析。 论文应用Pro-Q Diamond染色方法检测Cllang’s cell的磷酸化蛋白质，建立了可应用于磷酸化蛋白质组学研究的规模化鉴定方法。总共鉴定了Chang’s cell中的269个(含Group)磷酸化蛋白质，其中有27个蛋白质为swissprot库收录的已确证的磷酸化蛋白质。同时，对2-DE胶上磷酸化蛋白质谱进行了分析，寻找出磷酸化蛋白质在表达水平上的分析指标，为磷酸化蛋白质表达水平在体外动态检测以及相对定量分析奠定了基础。 论文采用Pro-Q Diamond染色方法与荧光差示凝胶电泳(DIGE)相结合的方法进行磷酸化蛋白质的相对定量研究，对Neuro2A小鼠成神经瘤细胞的PKc信号通路中的磷酸化蛋白质时态变化进行观测，总共找到143个差异点，125个蛋白点得到可靠鉴定结果，其中43个蛋白质为PhosphoSite Database收录的磷酸化蛋白质。对差异蛋白质进行了功能分析，发现许多差异蛋白质的功能与PKC引起的细胞效应相符，在一定程度上反映了DG/PKC信号转导的分子途径。