【摘 要】
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目的:本研究通过生信数据库、二维液相-色谱质谱联用技术、免疫印迹技术、免疫组织化学技术挖掘了结直肠癌（Colorectal cancer,CRC）组织和配对的癌旁组织中线粒体外膜转位酶40（Translocase of outer mitochondrial membrane 40,TOMM40）蛋白表达量的差异,通过细胞功能实验进一步验证了TOMM40的蛋白表达量对结直肠癌细胞生物学功能的影响,
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目的:本研究通过生信数据库、二维液相-色谱质谱联用技术、免疫印迹技术、免疫组织化学技术挖掘了结直肠癌（Colorectal cancer,CRC）组织和配对的癌旁组织中线粒体外膜转位酶40（Translocase of outer mitochondrial membrane 40,TOMM40）蛋白表达量的差异,通过细胞功能实验进一步验证了TOMM40的蛋白表达量对结直肠癌细胞生物学功能的影响,为结直肠癌的诊治工作提供了新的方向,也为探究结直肠癌的发生发展机制提供了另一种可能。方法:1.查阅Timer数据库和GEPIA数据库确定TOMM40在结直肠癌中表达情况,通过Cbioportal数据库获得TOMM40的共表达基因。2.二维液相色谱-质谱联用技术检测16对结直肠癌及其癌旁组织的TOMM40蛋白表达情况,再通过Western Blot验证二维液相色谱-质谱联用技术检测结果。通过免疫组织化学技术对临床组织样本进行分析,检测40对结直肠癌组织及其癌旁组织蜡块中TOMM40的蛋白表达情况。3.选取SW620结直肠癌细胞系作为目标细胞系,构建TOMM40过表达和沉默表达的细胞株,并通过荧光显微镜、RT-q PCR技术及Western Blot试验进行验证,而后通过细胞增殖实验、细胞迁移和侵袭实验、细胞凋亡实验检测TOMM40蛋白表达量的变化对细胞生物学功能的影响。结果:1.TOMM40在结直肠癌组织中上调表达。2.二维液相色谱-质谱联用技术及Western Blot验证了TOMM40在结直肠癌组织中上调表达。免疫组化学技术对临床组织样本分析后,也证实了TOMM40在结直肠癌组织中是上调表达的。3.成功构建了瞬时转染的SW620过表达及沉默表达细胞系。细胞增殖实验及细胞迁移和侵袭实验表明过表达TOMM40可促进细胞的增殖、迁移及侵袭,沉默表达TOMM40可抑制细胞的增殖、迁移及侵袭。细胞凋亡实验表明过表达TOMM40可抑制细胞的凋亡,沉默表达TOMM40可促进细胞的凋亡。结论:1.TOMM40在结直肠癌组织中是上调表达的。2.TOMM40上调表达可促进结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭功能,TOMM40上调表达可抑制结直肠癌细胞的凋亡。TOMM40沉默表达可抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭,并促进结直肠癌细胞的凋亡。3.TOMM40有潜力作为结直肠癌诊断及治疗的生物标志物。
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