姜黄素提高顺铂对脊索瘤细胞系CM-319化疗敏感性的初步研究

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目的观察姜黄素对人脊索瘤细胞系CM-319顺铂化疗的敏感性,并探讨其可能的作用机制。方法体外培养脊索瘤细胞系CM-319,并根据不同的实验目的分为4组:(1)空白对照组(仅给予0.1%DMSO);(2)顺铂组(0~40mg/L);(3)姜黄素组(0~40μmol/L);(4)顺铂+姜黄素组。根据不同的研究目的孵育24h,乳酸脱氢酶实验筛选顺铂和姜黄素的最大作用浓度。WST-8法检测CM-319细胞的增殖情况;流式细胞术检测细胞周期的改变以及凋亡;实时定量PCR检测MDR1和MRP1mRNA的表达,Western blot检测细胞核内HIF-1α和胞浆中P-gp、MRP1蛋白表达。结果1.乳酸脱氢酶释放实验显示,0~30mg/L顺铂对CM-319细胞LDH漏出率无明显影响(P>0.05)。30mg/L顺铂联合不同浓度姜黄素共孵育CM-319细胞24h,姜黄素最大联合剂量为30μmol/L。2. WST-8结果显示:30μmol/L姜黄素本身对CM-319细胞具有一定的生长抑制作用,虽然顺铂也能在一定程度上抑制CM-319细胞的生长,但抑制率较低。而两者联合后,CM-319细胞增殖明显降低。3.实时定量PCR结果显示,CM-319中MDR1几乎不表达,且姜黄素和(或)顺铂并不影响其表达。MRP1在CM-319细胞中表达较高,姜黄素单独作用后能降低其mRNA水平,顺铂单独作用24h对其mRNA水平无明显改变。而两者联合后,两者同时作用是能使MRP1mRNA水平降低。4. Western blot显示,CM-319细胞中MDR1的编码产物P-gp表达很低。相比之下,MRP1表达较高。HIF-1α在细胞核中呈一定的表达。姜黄素能在一定程度上降低胞内MRP1蛋白含量,同时也能降低胞核中HIF-1α的含量。顺铂对胞内MRP1蛋白含量及胞核中HIF-1α的含量无明显的影响,当姜黄素和顺铂联合使用后,MRP1和HIF-1α表达水平可见降低。5.流式细胞术检测结果显示对照组细胞S期所占分数为22.65%,G1期54.30%,G2期23.05%,凋亡率为2.91%。姜黄素联合顺铂作用细胞后S期所占分数分为5.47%,G1期占87.23%,G2期为7.34%,凋亡率为25.28%。结论姜黄素能增加CM-319细胞对顺铂抑制的敏感性,从而发挥对人脊索瘤细胞的生长抑制作用。
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