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纤维蛋白原样蛋白1（Fibrinogen-like protein 1,FGL1）,又称为肝细胞源性纤维蛋白原相关蛋白1（Hepatocyte-derived fibrinogen-related protein 1,HFREP1）或促肝细胞增殖因子（hepassocin）,是一种具有肝细胞丝裂原活性的肝脏因子,最初作为一种在肝癌细胞中过表达的转录产物被发现,该蛋白与血管生成素、血管生成素相关蛋白、纤维蛋白原样蛋白2等都属于纤维蛋白原超家族。在正常生理条件下,FGL1主要由肝细胞分泌,参与肝细胞的有丝分裂和代谢功能。与正常肝细胞相比,在肝癌细胞中,FGL1的m RNA和蛋白表达水平均下降或缺失。来源于人和小鼠的研究表明,宿主细胞共抑制分子表达上调是持续性感染、肿瘤和自身免疫病形成的重要原因之一。淋巴细胞活化基因3（lymphocyte activation gene 3,LAG3）,是一类主要表达于活化的T细、胞表面的共抑制分子。研究表明,FGL1是LAG3的主要抑制性配体,FGL1与LAG3互作在体内外均可抑制T细胞的抗肿瘤效应,沉默FGL1基因在小鼠模型中可以促进T细胞的抗肿瘤效应,从而揭示了一种新的免疫逃避机制。为了研究猪纤维蛋白原样蛋白1在免疫抑制性猪病发病机制中的作用,并为相关研究积累材料,本研究提取猪肝脏组织总RNA,采用RT-PCR方法扩增猪FGL1基因,原核表达获得纯化的猪FGL1重组蛋白,分别免疫小鼠和家兔,制备抗猪FGL1的鼠单克隆抗体和兔多克隆抗体,在对抗体进行鉴定的基础上,利用制备的抗体建立了检测猪FGL1的双抗夹心ELISA检测方法,以期为猪FGL1在猪群免疫抑制性疾病中的相关研究积累资料并提供基础。本研究的内容和结果如下:（1）提取猪新鲜肝脏组织总RNA,采用RT-PCR方法成功扩增到删除信号肽序列的猪FGL1基因片段,将目的基因插入p QE-30载体构建了原核表达载体（p QE-30-FGL1）,IPTG诱导后获得了原核表达的猪FGL1,对获得的目的蛋白经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,进行大量表达,最终获得了纯化猪FGL1蛋白;（2）用纯化的猪FGL1免疫Balb/C小鼠,经细胞融合、亚克隆等,获得了2株能够稳定分泌猪FGL1抗体的杂交瘤细胞,分别命名为2D7和4G7;抗体亚型鉴定显示两株细胞分泌的抗体均为Ig G1,通过Western blot和IFA鉴定结果显示,4G7既可用于猪FGL1的Western blot检测,也可用于该蛋白的IFA检测;采用纯化的目的蛋白免疫家兔,获得了效价较高的抗猪FGL1多克隆抗体;（3）利用获得的猪FGL1鼠单克隆抗体与兔多克隆抗体,以单克隆抗体作为捕获抗体,兔多克隆抗体作为检测抗体,在对一系列条件进行优化的基础上,建立了检测猪FGL1的双抗夹心ELISA方法。结果显示,以10μg/m L鼠抗猪FGL1单克隆抗体为捕获抗体,100μL/孔4℃包被过夜,加入待测样品,37℃孵育1 h,然后加入1:1,000稀释的兔抗猪FGL1多克隆抗体,37℃孵育1 h,再加入1:3,000稀释的HRP标记的马抗兔Ig G,37℃孵育1 h,最后加入TMB底物显色液,室温避光显色20 min,酶标仪检测OD450nm。综上所述,本研究成功表达了猪FGL1蛋白,并制备抗猪FGL1的特异性单克隆抗体及兔多克隆抗体,利用制备的抗体建立了猪FGL1双抗夹心ELISA的检测方法,以期为后续探究猪FGL1在猪群免疫抑制性疾病中的作用研究提供技术支持。