缢蛏是我国四大海水养殖贝类之一，在浙江和福建已有数百年的养殖历史。随着沿海城市经济的发展，海洋污染日益加剧，已经严重威胁到了缢蛏的生存和生长，因此必须对目前的缢蛏种质资源进行合理的开发和利用。本研究克隆了缢蛏碱性磷酸酶基因，并研究了其在重金属铜、锌胁迫作用下的表达情况。具体研究内容如下：1.缢蛏碱性磷酸酶基因的分子特性及其组织表达分析以缢蛏为材料，根据实验室构建的缢蛏肝脏cDNA文库中已标注的EST序列，利用RACE技术克隆得到了缢蛏ALP基因的cDNA全序列。该序列全长1837bp，5′端非翻译区为130bp，3′端非翻译区为117bp。开放阅读框（ORF）长度为1590bp，可编码529个氨基酸，含有1个由5个氨基酸组成的信号肽。推测得到的缢蛏缢蛏碱性磷酸酶前体肽具有29个磷酸化位点，与人（Homo sapiens）的碱性磷酸酶3D结构有高度的相似性。同源分析表明，该基因编码的蛋白与合浦珠母贝（Pinctada fucat）ALP氨基酸序列的相似性最高为48%。系统进化分析表明，缢蛏与合浦珠母贝聚集在一起，但与脊椎动物中的鱼类、两栖类、哺乳动物距离较远。利用实时荧光定量PCR检测成体缢蛏的水管、斧足、腮、外套膜、肝脏及性腺6个不同组织中ALP基因的表达情况，结果显示缢蛏ALP基因在肝脏的表达量最高，其次为外套膜，在水管中的表达量最低。说明，成体缢蛏的碱性磷酸酶具有组织特异性。2. Cu²⁺、Zn²⁺胁迫对缢蛏碱性磷酸酶基因表达的影响运用荧光定量PCR技术分析Cu²⁺、Zn²⁺在不同剂量以及不同处理时间下对缢蛏不同组织ALP基因表达的影响。实验结果显示，Cu²⁺和Zn²⁺对缢蛏不同组织ALP基因的表达影响不尽相同：在Cu²⁺的胁迫下，缢蛏水管、腮、斧足、外套膜ALP基因表达呈现整体下降的趋势，肝脏中ALP基因的表达呈现先升高、后降低的趋势，性腺中ALP基因的表达量无明显变化；在Zn²⁺的胁迫下，水管、腮、外套膜ALP基因表达呈现先升高、后降低的趋势，斧足和肝脏中ALP基因的表达呈现整体持续升高的趋势，性腺中ALP基因的表达量无明显变化。实验结果还显示，不同浓度Cu²⁺、Zn²⁺以及不同处理时间与缢蛏ALP基因表达的存在一定的相关性。3. Cu²⁺和Zn²⁺对缢蛏的急性毒性研究用静态急性毒性试验方法，研究了12h、24h、36h、48h、72h和96h内重金属Cu²⁺、Zn²⁺对缢蛏的毒性影响。结果表明：Cu²⁺对缢蛏的2h、12h、24h、36h、48h、72h和96h的LC50为1.022mg·L^-1、0.623mg·L^-1、0.277mg·L^-1、0.194mg·L^-1、0.073mg·L^-1、0.064mg·L^-1和0.044mg·L^-1；Zn²⁺对缢蛏的2h、12h、24h、36h、48h、72h和96h的LC50为34.601mg·L^-1、26.145mg·L^-1、23.563mg·L^-1、9,908mg·L^-1、6.531mg·L^-1、4.127mg·L^-1和2.664mg·L^-1。经过计算的到Cu²⁺和Zn²⁺对缢蛏的安全浓度分别为：0.004mg·L^-1、0.226mg·L^-1，说明Cu²⁺对缢蛏的毒性远大于Zn²⁺。此外，还初步探讨了Cu²⁺和Zn²⁺对缢蛏的急性毒性效应和致毒机理，且差异显著。4.缢蛏SRAP-PCR体系的正交优化运用L16（45）正交设计对影响缢蛏SRAP-PCR反应的5个因素：Taq酶浓度、Mg²⁺浓度、模板DNA浓度、dNTPs浓度、引物浓度在4个水平上进行了优化试验，PCR结果采用SPSS v16.0软件分析。结果表明，各因素对SRAP-PCR反应的影响依次为：引物>Taq酶>DNA模板DNA> Mg²⁺；缢蛏SRAP反应最佳体系为：在20μLPCR反应体系中，引物0.3μmolL^-1、Taq酶0.5U、模板DNA50ng、dNTPs0.2mmolL^-1、Mg²⁺2mmolL^-1。用不同缢蛏的基因组DNA两次SRAP-PCR扩增，8对引物均能扩增出清晰且重复性好的普带。因而建立的缢蛏反应体系稳定可靠。