实时荧光定量PCR检测骨肉瘤病人血清中microRNA的表达

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目的:探索骨肉瘤病人血清中相关miRNA的表达水平,为进一步研究miRNA与骨肉瘤的诊断和治疗做基础。材料与方法:应用茎-环状反转录引物实时荧光定量PCR(stem-loop RT-qPCR,TaqMan探针法)检测骨肉瘤病人血清中相关miRNA的表达水平。收集骨肉瘤病人未化疗组血清10例,骨肉瘤病人化疗组血清10例和健康人血清10例。以U6 snRNA为内参,检测miR-29c, miR-132, miR-199a-3p, miR-221在血清中的表达水平。分析骨肉瘤临床病理特征与miRNA表达水平之间的关系。所有资料输入SPSS 17.0统计软件中处理,以a=0.05作为检验标准。结果:1.4种miRNA在所有血清标本中都能检测到。2.与健康人比较,miR-29c和miR-221在骨肉瘤病人血清中的表达水平上调,P<0.05; miR-199a-3p和miR-132没有明显差别,P>0.05。3.4种miRNA在骨肉瘤病人血清中的表达水平与病理分级、病理分型、Enneking外科分期、ALP无关,P>0.05。4.4种miRNA在骨肉瘤病人血清中的表达水平未化疗组与化疗组之间无明显差异,P>0.05。结论:1.人血清中存在miRNA并且可以方便的应用实时荧光定量PCR进行检测;Stem-loop RT-qPCR (TaqMan探针法)检测法是灵敏的,特异的,方便的定量检测miRNA的方法。2. miR-29c和miR-221在骨肉瘤病人血清中的表达水平上调,可作为骨肉瘤的候选血清学生物标志。3.骨肉瘤可能存在特异性的血清miRNA表达谱。
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