【摘 要】
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目的：探讨转染克老素(klotho,KL)基因对成骨细胞(osteoblast)活性的影响,揭示KL经FGF23(成纤维生长因子23)信号通路对骨代谢调节的分子机制。方法：提取原代骨髓间充质干细胞(BM
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目的：探讨转染克老素(klotho,KL)基因对成骨细胞(osteoblast)活性的影响,揭示KL经FGF23(成纤维生长因子23)信号通路对骨代谢调节的分子机制。方法：提取原代骨髓间充质干细胞(BMSCs)并培养,用倒置显微镜观察BMSCs形态。BMSCs培养至第三代时做流式鉴定,之后换为诱导培养基培养14-21天,诱导为成骨细胞,用茜素红染色鉴定是否诱导成功。通过rAAV(重组腺相关病毒载体)介导小鼠Klotho基因转染成骨细胞。实验分为五组：空白对照组(control组),klotho转染组(KL组),klotho转染+FGFR1抑制剂(BGJ398)组(KL+BGJ398组),空载体组(rAAV组),空载体+FGFR1抑制剂(BGJ398)组(rAAV+BGJ398组)。分组处理72小时后,荧光倒置显微镜观察成骨细胞腺病毒表达情况,RT-PCR检测成骨细胞的KL mRNA的表达,ELISA检测上清液KL蛋白的含量；RT-PCR检测成骨细胞分泌物：骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)的mRNA表达。结果：成功提取原代骨髓间充质干细胞,并且成功向成骨方向诱导。通过rAAV转染KL后,成骨细胞高表达外源性KL蛋白(p<0.01),并在KL-FGF23-FGFR1通路正常的情况下可显著促进成骨细胞分泌OCN(p<0.05),显著抑制成骨细胞分泌OPN(p<0.05)。结论：KL可以促进成骨细胞的活力,可能是通过KL-FGF23-FGFR1通路发挥作用。
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