核酸和蛋白质的定量分析在生物化学和临床医学中具有重要意义,常用的方法主要是分光光度法和荧光法,但它们都存在一定的缺陷.分光光度法灵敏度低、步骤复杂、耗时长;荧光光度法仅限于荧光体系,试剂昂贵且有毒.而化学发光法(CL)和共振光散射法(RLS)灵敏度高、简便快捷,是新型生化分析方法. 本文第一章对化学发光法、共振光散射法和染料探针的应用进行了综述. 第二章,经过实验发现并应用一种新的流动注射化学发光法检测蛋白质,此方法利用了蛋白质在Ru(phen)<,3>Br<,2>-KMnO<,4>-HCl体系中产生较强化学发光的性质.在最佳条件下,牛血清白蛋白(BSA)浓度在6.0x10<'-7>-1.0×10<,-4>g/mL范围内与化学发光强度呈良好的线性关系,检出限(3σ为2.5x10<'-7>g/mL,对1.0×10<'-6>g/mL的:BSA进行11次平行测定,相对标准偏差(RSD)为2.1﹪;卵蛋白(EA)浓度在6.0x10<'-6>-1.0×10<'-4>g/mL范围内与化学发光强度呈良好的线性关系,检出限(3σ)为3.5x10<'-7>g/mL,对8.0x10<'-6>g/mL EA进行11次平行测定,RSD为1.4﹪.本方法已成功用于鸡蛋蛋清中总蛋白含量的测定,回收率在97﹪-102﹪. 蛋白质在酸性介质中可与高锰酸钾反应产生化学发光,并且甲醛对发光强度有很强的促进作用.我们用流动注射法在最佳条件下研究此化学发光体系,实验结果表明,在最佳条件下BSA浓度在4.0x10<'-7>-1.0×10<'-5>g/mL和1.0×10<'-5>-1.0×10<'-4>NmL范围内分别与化学发光强度呈良好的线性关系,检出限(3σ)为8.6x10<'-8>8g/mL,对8.0x10<'-7>g/mL和2.0x10<'-5>g/mL的BSA分别进行11次平行测定,RSD分别为1.9﹪和2.3﹪;EA浓度在4.0x10<'-7>-1.0×10<'-4>g/mL范围内与化学发光强度呈良好的线性关系,检出限(3σ)为3.2x10<'-7>g/mL,对6.0x10<'-7>g/mLEA进行11次平行测定,RSD为1.8﹪.本方法已成功用于鸡蛋蛋清中总蛋白含量的测定. 第三章,核酸可与高锰酸钾在酸性介质中反应产生化学发光,甲醛对发光强度有很强的促进作用.我们用流动注射法研究此体系,结果表明,在最佳条件下,酵母RNA(yKNA)浓度在2.0x10<'-7>-1.0×10<'-4>g/mL范围内与化学发光强度呈良好的线性关系,检出限(3σ)为1.6×10<'-7>g/mL,对8.0x10<'-7>g/mL的yRNA进行11次平行测定,RSD为1.2﹪.小牛胸腺DNA(ctDNA)的浓度在8.0x10<'-7>-1.0×10<'-4>g/ml,范围内与化学发光强度呈现良好的线性关系,对1.2×10<'-6>mL的ctDNA进行11次平行测定,RSD为2.3﹪,检出限为(3σ)为4.7×10<'-7>.本方法已用于啤酒酵母提取液中:RNA含量的测定,结果良好. 第四章合成了4-硝基锰酞菁并探讨了其在共振光散射中对生物大分子的测定.首先研究了4-硝基锰酞菁共振光散射法在核酸测定中的应用,4-硝基锰酞菁在250.0-750.0nm之间有弱的共振光散射,在酸度合适的介质中,核酸能使其396.nm处的共振散射峰显著增强,且增强程度与核酸呈良好的线性关系.据此,建立了核酸的共振光散射增强的分析方法.在最佳条件下,ctDNA和yRNA.的线性范围分别为0-500.OnK/mL和0-1000.OnK/mL,检出限(3σ)分别为1.0ng/mL和2.2ng/mL,分别对100nG/mL的ctDNA和yRNA进行11次平行测定的RSD为1.5﹪和2.1﹪.使用本方法测定了合成样品中的DNA,结果令人满意.