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目的:研究米诺环素对大鼠循环死亡后肝移植缺血再灌注损伤的保护作用及其分子机制。 方法:采用“磁环法”建立大鼠心脏停跳后肝移植模型,体重为250g~280g的SD雄性大鼠随机分为4组:假手术组(SHAM组)、心脏停跳后肝移植组(DCD组)、米诺环素组(MIN组)、线粒体通透性转换孔开放剂苍术苷+米诺环素组(ATR+MIN组),SHAM组24只,其余每组24对。MIN组在移植再灌注后经阴茎背静脉注射10mg/kg米诺环素,ATR+MIN组在MIN组基础上经阴茎背静脉注射2mg/kg苍术苷。受体术后2h、6h、24h检测线粒体通透性转换孔(MPTP)开放状态;Western印迹及免疫组化检测含半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)和细胞色素c(Cyt C)蛋白的表达;检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平;肝脏组织进行HE染色,观察组织学改变并计算相应评分(按照Suzukis标准);计算各组术后存活率。 结果:⑴受体再灌注后2h、6h、24 h与SHAM组比较其余各组血清ALT、AST水平显著升高(均为P<0.01),与DCD组和ATR+MIN组比较MIN组血清ALT、AST水平明显降低(均为P<0.01),而DCD组和ATR+MIN组之间无显著差异(P>0.05),说明MIN组的受体肝功能得到明显改善。⑵SHAM组与正常肝组织基本相同,肝细胞排列整齐,肝小叶结构完整,肝索排列有序,未见明显肝细胞水肿或变性,无中心粒细胞浸润及肝细胞凋亡和坏死等现象。DCD组及ATR+MIN组:肝细胞水肿、肝窦淤血、局部点片状坏死、细胞界限不清、汇管区淋巴细胞浸润。MIN组虽也有肝细胞水肿、点片状坏死、淋巴细胞浸润,但肝窦淤血较轻,肝小叶结构较清晰,总体病变程度较轻。⑶术后2h、6h、24h,与SHAM组比较,各组大鼠肝组织Cyt C和Caspase3蛋白的表达明显升高(均为P<0.05);与DCD组和ATR+MIN组比较,MIN组大鼠肝组织Cyt C和Caspase3蛋白的表达明显减少(P<0.05),ATR+MIN组和MIN组之间无明显差别(P>0.05)。⑷免疫组化分析显示,SHAM组肝脏胞浆内有很少量Cyt C及Caspase3的表达。DCD组和ATR+MIN组均有大量表达。MIN组Cyt C及Caspase3的表达均明显轻于DCD组和ATR+MIN组(P<0.05)。说明MIN组相比于DCD组,肝组织细胞的凋亡相对较少。⑸与SHAM组比较,其余各组A值明显升高(P<0.01),表明MPTP开放增加;与DCD组和ATR+MIN组比较,MIN组A值降低(P<0.05),表明MPTP开放受到抑制;DCD组和ATR+MIN组之间比较A值无明显差别(P>0.05),表明MPTP开放剂苍术苷抑制了米诺环素作用。⑹DCD组6只受体中3只存活超过7天,2只存活超过30天;ATR+MIN组有4只存活超过7天,2只超过30天;MIN组6只存活均超过7天,其中4只超过30天(P<0.05)。 结论:米诺环素可减轻大鼠DCD肝移植的缺血再灌注损伤,其机制可能是通过抑制MPTP开放,阻止Cyt C释放和Caspase3激活减轻肝细胞的凋亡,且这种作用可以被MPTP开放剂阻断。