黑曲霉提取物与水杨酸对长春花悬浮细胞生长及生物碱代谢作用的研究

来源 :湖南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wucong520123
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在植物细胞培养过程中,添加诱导子是提高植物次生代谢有效的方法之一。本文以黑曲霉提取物和水杨酸作为诱导子就长春花细胞悬浮培养过程中诱导子与其相互作用关系及诱导子对生物碱代谢的影响等方面进行初步探讨,研究结果如下: 毛霉、木霉、青霉、黑曲霉及酵母提取物5种真菌诱导子处理均能提高长春花悬浮培养细胞中生物碱的含量。在长春花悬浮培养细胞对数生长末期加入浓度为300μg/mL黑曲霉诱导子,生物碱含量达到了666μg/gFW,是对照的1.6倍。 真菌诱导子能激发长春花悬浮培养细胞的防御性应答反应。产生氧进发,细胞的氧化还原态势发生了明显的变化,培养基发生碱化现象,膜脂过氧化产物MDA含量大幅提高,蛋白质含量提高,POD、CAT的活力出现波动性变化,并具有一定的时序性。同时,与生物碱代谢有关的PAL的活力得到提高。 真菌诱导后加入200mmol/L氯化钙能够加强诱导子的诱导效果,生物碱含量进一步提高,达到730μg/gFw;而10mmol/L EGTA和1mmol/L LaCl。抑制真菌诱导子的诱导效果,对生物碱含量没有影响。 通过添加不同浓度的水杨酸(SA),比较它们对长春花细胞POD、PAL、H2O2含量及对细胞生长和生物碱含量的影响,结果表明,SA可提高POD及PAL的活性,促进细胞内H2O2含量的上升并有利于生物碱的合成,其中10mg/L水杨酸对生物碱合成的促进效果明显,生物碱含量为对照组的1.3倍。 经过300μg/mL黑曲霉诱导子(FO),10mg/L水杨酸(SA),300μg/mL黑曲霉诱导子+10mg/L SA 3种处理,对长春花悬浮细胞膜脂过氧化和生物碱合成的影响。结果表明:FO和SA单独处理细胞均引起长春花细胞膜脂过氧化。SA+FO联合处理可以减轻FO单独处理细胞所引起的膜脂过氧化程度。SA+FO联合处理与真菌诱导子处理相比,较大地提高了过氧化物酶及苯丙氨酸解氨酶的活性。3种处理方法均可提高长春花细胞生物碱含量,特别以FO+SA处理含量最高,达到700μg/gFw。结果显示:在真菌诱导子诱导与水扬酸的联合作用下提高生物碱含量,可能与水杨酸减轻真菌诱导子所引起的细胞膜脂过氧化程度有关。
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