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目的：淋巴细胞具有独立的胆碱能系统,包括乙酰胆碱(Ach)、胆碱乙酰基转移酶(ChAT)、乙酰胆碱酯酶(AChE)、M型乙酰胆碱受体(mAChR)和N型乙酰胆碱受体(nAChR).小鼠胸腺中未成熟的T淋巴细胞、大鼠脾脏CD3+T淋巴细胞和多种T细胞株均表达α7烟碱型乙酰胆碱受体(a7nAChR),且此受体在胆碱能抗炎通路中也发挥重要作用。前期研究证实小鼠CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)表面表达a7nAChR,且激活该受体可以增强CD4+CD25+Treg的免疫抑制功能。本实验对CD4+CD25+Treg中a7nAChR与JAK3-STAT5信号通路之间的关系进行了进一步的研究。方法：1.采用免疫磁珠法分选正常C57BL/6J小鼠脾脏CD4+CD25+Treg,流式细胞术鉴定CD4+CD25+Treg的纯度,台盼蓝染色鉴定其活性；2.a7nAChR激动剂烟碱、受体特异性拮抗剂α-银环蛇毒预处理Treg后,与CD4+CD25-T细胞共培养,使用MTT法检测CD4+CD25-T细胞的增殖变化情况；3.通过激光共聚焦、Western blot技术检测CD4+CD25+Treg细胞表面a7nAChR下游相关信号通路蛋白JAK3及STAT5的表达情况；4.同样方法采用烟碱及α-银环蛇毒预处理CD4+CD25+Treg后,通过Western blot法检测细胞中JAK3及STAT5蛋白的表达变化情况。结果：1.免疫磁珠法分选得到的CD4+CD25+Treg细胞纯度在90%以上,台盼蓝染色显示细胞活性大于97%。2.MTT检测显示10μmol/L烟碱刺激可增强Treg细胞对CD4+CD25-T细胞的抑制效应,1μmol/Lα-银环蛇毒单独作用、烟碱与α-银环蛇毒联合作用Treg细胞后,与对照组(未处理Treg细胞)相比Treg细胞的免疫抑制功能无明显变化。3.激光共聚焦荧光检测分析显示,CD4+CD25+Treg胞浆中存在JAK3、STAT5蛋白及其磷酸化形式p-JAK3、p-STAT5。同一视野下,CD4+CD25+Treg在495nm激光激发下,细胞表面的CD25-PE发出橙色荧光,胞浆中FITC二抗间接标记的JAK3、p- JAK3、STAT5和p-STAT5发出绿色荧光,软件叠加后图片显示为橘黄色荧光。Western blot技术进一步在蛋白水平检测CD4+CD25+Treg内存在JAK3、p- JAK3、STAT5和p-STAT5表达,其分子量分别为106kD、106kD、92kD和94kD。4.烟碱处理后,CD4+CD25+Treg上a7nAChR下游信号通路p-JAK3及p-STAT5蛋白表达增高,α-银环蛇毒单独作用、烟碱与α-银环蛇毒联合作用Treg细胞后,上述两蛋白水平无显著改变。结论：1.激活a7nAChR,可以增强CD4+CD25+Treg细胞对CD4+CD25-T细胞的免疫抑制效应。2.CD4+CD25+Treg细胞存在JAK3. p- JAK3. STAT5和P-STAT5表达。3.烟碱可以增强p- JAK3和P-STAT5表达,a7nAChR特异性拮抗剂可以逆转该效应。