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目的:本研究通过选用wistar成年雄性大鼠为实验对象,复制IBS-D动物模型,明确痛泻要方中白芍防风对腹泻型肠易激综合征的治疗效果,用实时荧光定量分析海马组织和结肠组织BDNFmRNA的表达值,应用16SrRNA技术研究其对IBS-D动物模型肠道菌群的影响,深入探索BDNF-TrkB信号通路痛泻要方“抑木”组分白芍防风调控肠道菌群结构缓解IBS-D内脏高敏的作用机制,为治疗IBS-D提供新的治疗思路及方法。方法:40只成年雄性wistar大鼠随机抽取10只作为空白对照组,其余大鼠均为模型组大鼠。采用结直肠扩张法(压力80mmHg)构建动物模型,造模周期为14天,造模期间给予充足的水和饲料。造模结束后,通过结直肠扩张检测观察大鼠腹部回缩反应(abdominal withdrawal reflex,AWR)结合结直肠病理检测判定造模成功与否。造模成功的大鼠随机分为3组:模型组(n=10)、白芍防风组(n=10)、陈皮白术组(n=10),次日给予药物灌胃治疗。在实验期间中观察每组大鼠一般状况、体重、大便情况。于造模前后、治疗前后称重每只大鼠体重。于造模后即治疗前和治疗结束后记录每组大鼠大便性状(布里斯托大便分类法)。于造模后及治疗后检测每只大鼠腹壁回缩反应。于治疗结束后留取新鲜粪便标本,取切除结肠和直肠末端8cm以及海马组织。每组分别采用5只大鼠海马组织和结肠组织,提取样本总的RNA,经反转录酶的作用从RNA合成cDNA,再以从DNA为模版,扩增合成目的片段。通过提取样本总RNA、逆转录反应、实时荧光定量聚合酶链反应得到BDNAmRNA表达水平。每组分别采用5只大鼠留取的粪便标本应用16SrRNA技术、Illumina平台测序、生物信息学分析技术,通过数据指控、OTU聚类、分配分类单元等比较各组大鼠肠道菌群结构变化。结果:(1)大鼠一般情况观察:空白组大鼠:大鼠一般情况良好,毛发顺,有色泽,进食正常,对外界刺激反应灵敏。大便正常,无腹泻;模型组大鼠:于造模第2天出现警惕性增高,对外界刺激过于敏感,于第4天出现精神欠佳,毛发乱,进食减少,大便稀溏;白芍防风组大鼠于给药后第2天精神好转,进食量增加,造模结束后大便基本成形;陈皮白术组大鼠于给药后第7天出现精神状态好转,造模结束后部分大鼠的大便有不成形情况。(2)大鼠体重:与空白组相比,模型组大鼠体重增长较空白组少(P<0.05)。治疗结束后,白芍防风组和陈皮白术组大鼠体增加较模型组大鼠高,具有统计学意义(P<0.05),但白芍防风组对体重影响明显。(3)大鼠大便情况:造模后,模型组大鼠大便Bristol Stool Scale评分与空白组差异有统计学意义(P<0.05),造模后大鼠的Bristol Stool Scale评分升高趋势;给予治疗后,白芍防风组、陈皮白术组与模型组大鼠比较,大便Bristol Stool Scale评分降低,差异有统计学意义(P<0.05),且白芍防风组对大便评分影响明显。(4)大鼠内脏疼痛阈值:与空白组相比较,模型组大鼠疼痛阈值明显降低,差异有统计学意义(p<0.05);治疗结束后,白芍防风组大鼠内脏疼痛阈值较造模后升高,差异有统计学意义(P<0.05),陈皮白术组大鼠治疗后内脏疼痛阈值改善不明显,差异无统计学意义(P<0.05)(5)大鼠标本病理学检测:各组大鼠结肠上皮组织均无明显炎性细胞浸润和间质水肿,符合IBS-D病理学改变。(6)大鼠海马及结肠组织BDNFmRNA表达情况:在结肠组织中,模型组大鼠结肠BDNFmRNA表达水平显著强于空白组,差异具有统计学意义(P<0.01);与模型组相比,白芍防风组大鼠结肠中BDNFmRNA表达明显降低,差异显著(P<0.05);陈皮白术组大鼠结肠中BDNFmRNA表达无明显差异(P>0.05),不具备统计学意义。在海马组织中,模型组大鼠BDNFmRNA表达较空白组大鼠有明显的降低,差异极显著(P<0.01)。与模型组相比,白芍防风组大鼠海马组织BDNFmRNA表达值明显升高,差异极显著(P<0.05);陈皮白术组大鼠海马中BDNFmRNA表达明显升高,差异显著(P<0.05)。(7)大鼠肠道菌群的影响:IBS-D大鼠的菌群多样性下降。与空白组相比,IBS-D大鼠模型肠道菌群拟杆菌门降低,厚壁菌门升高,变形菌门升高。白芍防风组和陈皮白术组能增加拟杆菌,可降低厚壁杆菌和变形菌门丰度的表达。结论:痛泻要方抑木组分白芍防风可以改善IBS-D模型大鼠的内脏高敏。其作用机制可能通过改善肠道菌群结构,调整脑肠BDNF差异性表达来实现。