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目的:1.研究正常骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)对多发性骨髓瘤细胞系(LP-1和U266)干性的影响。2.研究多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)对多发性骨髓瘤细胞系(LP-1和U266)干性的影响。3.探讨骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)影响多发性骨髓瘤细胞系(LP-1和U266)干性的机制。方法:1.采用Ficoll梯度离心法,分离培养正常及MM患者的BM-MSC。2.RT-PCR检测多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266与BM-MSCs直接接触组、Transwell组及LP-1和U266单培养组干性相关基因(OCT4、SOX2、NANOG)的表达情况。3.Western检测多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266与BM-MSCs直接接触组、Transwell组及LP-1和U266单培养组干性相关蛋白(OCT4A、SOX2、NANOG)的表达情况。4.软琼脂克隆形成实验检测多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266与BM-MSCs直接接触组、Transwell组及LP-1和U266单培养组克隆形成率的差异。5.RT-PCR检测多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266与BM-MSCs直接接触组、Transwell组及LP-1和U266单培养组BTK的表达情况。6.RT-PCR检测多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266共培养组(直接接触组和Transwell组)用BTK抑制剂PCI-32765处理组与未处理组,相关干性基因(OCT4、SOX2、NANOG)的表达情况7.Western Blot方法检测多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266与BM-MSCs共培养组(直接接触组和Transwell组)用BTK抑制剂PCI-32765处理与未处理后,相关干性蛋白(OCT4A、SOX2、NANOG)的表达情况8.使用软琼脂克隆形成实验检测多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266与BM-MSCs共培养组(直接接触组和Transwell组)用BTK抑制剂PCI-32765处理与未处理后,克隆形成率的差异。结果:1.多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266与BM-MSCs共培养组(直接接触组和Transwell组)与LP-1和U266单培养组相比干性相关基因(OCT4、SOX2、NANOG)的表达上调。2.多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266与BM-MSCs共培养组(直接接触组和Transwell组)与LP-1和U266单培养组相比干性相关蛋白(OCT4A、SOX2、NANOG)的表达上调。3.软琼脂克隆形成实验检测LP-1和U266与BM-MSCs共培养组(直接接触组和Transwell组)与LP-1和U266单培养组相比克隆形成率增高。4.多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266与BM-MSCs共培养组(直接接触组和Transwell组)与LP-1和U266单培养组相比BTK表达上调。5.多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266共培养组用BTK抑制剂PCI-32765处理后,相关干性基因(OCT4、SOX2、NANOG)的表达下调。6.多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266共培养组用BTK抑制剂PCI-32765处理后,干性相关蛋白(OCT4A、SOX2、NANOG)的表达下调。7.多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266共培养组用BTK抑制剂PCI-32765处理后,克隆形成率下降。结论:LP-1及U266细胞与正常和MM患者的BM-MSCs共培养,可以观察到LP-1及U266细胞干性相关基因及蛋白表达上调、克隆形成能力增加。因此本研究表明,BM-MSCs通过与多发性骨髓瘤细胞系直接接触及细胞因子分泌的方式促进多发性骨髓瘤细胞系干性。加入小分子BTK抑制剂PCI-32765后,使共培养组中干性相关基因及蛋白表达下降,同时抑制LP-1和U266细胞的克隆性增生。表明小分子化合物BTK抑制剂(PCI-32765)能抑制BM-MSCs对MM细胞系干性的增加。因此,这一研究为临床治疗甚至是治愈MM提供新的治疗策略,但本研究有一定的局限性,对于BTK影响BM-MSCs促进骨髓瘤细胞干性的机制还需要进一步验证。