目的1．建立和完善OB分离和培养技术2．探讨SI对体外培养原代大鼠OB增殖及分化等各方面的影响，为SI预防治疗PMO提供科学依据。方法1．体外大鼠OB的分离、原代培养和鉴定：取新生24小时Wistar大鼠颅骨，采用交替加入胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶进行多次消化法分离OB，进行原代体外培养，在培养第5天、7天、10天进行瑞氏染色和ALP染色（偶氮偶联法）鉴定OB。2．SI对体外原代大鼠OB增殖及分化影响的研究：（1）剂量分组：实验分为正常对照组（Normal Control组），SI各浓度组(10^-5M，10^-6M，10^-7M，10^-8M，10^-9M)，阳性对照组(E₂组，采用10^-10M的E₂)。（2）SI对OB增殖、分化的影响：待细胞贴壁后换加药培养基，分别测定加药培养基培养1-7天细胞MTT（OD），培养2天和4天后，取细胞培养液测定OB胞外ALP及BGP含量。3．SI对大鼠OBⅠ型胶原表达的影响：待细胞贴壁后，换加药培养基，培养4天后，提取细胞总RNA，RT-PCR扩增Ⅰ型胶原cDNA，同时扩增管家基因β-actin作为内对照。扫描PCR产物电泳图片，计算Ⅰ型胶原／β-actin的相对丰度比值，推算Ⅰ型胶原基因的相对表达水平。结果1．体外大鼠OB的分离及原代培养和鉴定：所培养的细胞呈长梭形，三角形等多种形态，胞浆突起形态各异，可见成簇生长，具有典型的OB形态学特征；细胞呈ALP染色阳性（阳性率＞95％），鉴定为OB。2．SI对体外原代大鼠OB增殖和分化影响的结果：（1）不同浓度SI作用于OB，MTT结果显示：与正常对照组比较，在培养1～4天，SI10^-8M～SI10^-5M组的MTT（OD）值有显著性增高（P＜0.05），从第5天开始增殖速度减慢，以第2、3天增殖最为明显且与E₂组比较无统计学意义（P＞0.05）；SI10^-9M组从第3天开始MTT（OD）值低于正常对照组，有统计学意义（P＜0.05）。正常对照组的增殖曲线可见，1-4天为潜伏期，4-7天处于指数增殖期，SI各浓度组与E₂组进入指数增殖期的时间早于正常对照组；E₂、SI10^-8M、SI10^-6M、SI10^-5M组其增殖曲线呈现阶梯状。（2）ALP测定结果：与正常对照组比较，OB培养第2天时，E₂组和SI10^-6M组可显著提高OB分泌ALP的活性（P＜0.05）；OB培养第4天，E₂组、SI10^-6M组和SI10^-5M组可显著提高OB分泌ALP的活性（P＜0.05）。与E₂组比较，SI10^-5M组、SI10^-9M组～SI10^-7M组OB分泌ALP的活性低于E₂组（P＜0.05）。（3）BGP测定结果：与正常对照组比较，OB培养第2天时，E₂组和SI10^-7M组可显著提高OB分泌BGP的活性（P＜0.05）。OB培养第4天，E₂组、SI10^-8M组和SI10^-7M组可显著提高OB分泌ALP的活性（P＜0.05）。与E₂组比较，SI10^-9M组、SI10^-8M组、SI10^-6M组和SI10^-5M组OB分泌BGP的活性低于E₂组（P＜0.05）。3．SI对大鼠OBⅠ型胶原表达的影响：与对照组比较，SI10^-7M、SI10^-5M组和E₂组可显著增加OB内Ⅰ型胶原的合成（P＜0.05）。结论1．以新生24小时Wistar大鼠颅骨为材料，采用交替加入胰蛋白酶和Ⅱ型胶原进行多次消化法分离OB，可获得高纯度、数量较多、功能活跃的OB。2．SI对OB的增殖活性受培养时间和SI浓度的影响：SI对OB增殖的有效浓度范围较大，为10^-8M～10^-5M，且在作用第2、3天最为显著；低浓度SI10^-9M从第3天开始的MTT（OD）值低于正常对照组。各浓度SI作用OB，其增殖曲线呈现不同形状且各周期的时限也不同，可能提示在不同浓度范围内，不同分裂增殖周期中的细胞对有效成份的反应不同，同时说明SI促进细胞增殖作用的复杂性和多样性。3．SI10^-6M和10^-5SM有提高OB分泌ALP活性的作用；S110^-8M和10^-7M有提高OB外BGP含量的作用。4．SI10^-7M、SI10^-5M组可提高Ⅰ型胶原mRNA表达。5．SI与E₂对OB增殖与分化的作用基本一致，具有促进骨形成的作用。