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前言Bmi-1(B-cell-specific Moloney murine leukemia virus insertion site 1)基因是多梳基因(polycomb group genes,PcG)家族成员中的转录抑制因子,是公认的一种原癌基因。近年来,在人类多种恶性肿瘤中均发现有Bmi-1蛋白表达。目前为止,Bmi-1在胃癌中表达的研究仅有Reinisch等报道了Bmi-1是一种表达在胃肠干细胞、分化细胞和肿瘤细胞的蛋白。胃腺颈部和大肠隐窝部是可能的胃肠干细胞区域,藤泽亨等采用免疫荧光双标记的方法观察Bcl-2+/ki-67-细胞位于该区域,因此以Bcl-2~+/ki-67~-作为可能的胃黏膜干细胞标记。本研究采用免疫组织化学方法,通过检测Bmi-1、Bcl-2和ki-67在正常胃黏膜、肠上皮化生、不典型增生和胃癌中的表达,分析三者之间的关系以及Bcl-2~+/ki-67~-细胞的分布,并探讨其与胃癌临床病理因素的关系及意义。目的本研究采用免疫组化方法,通过检测Bmi-1,ki-67和Bcl-2在正常胃黏膜、肠化生、不典型增生和胃癌中的表达,分析Bmi-1与核增殖抗原ki-67和凋亡抑制基因Bcl-2之间的关系以及Bcl-2~+/ki-67~-细胞的分布并探讨其与胃癌临床病理因素的关系及意义。材料与方法临床资料:收集中国医科大学附属第一医院肿瘤外科2006年8月～2008年5月手术切除胃癌组织162例及其配对正常胃黏膜,肠上皮化生82例,不典型增生52例。标本经10%福尔马林固定,常规石蜡包埋,制成4μm厚的切片,构建于4张组织芯片上。免疫组化染色与结果判定:采用免疫组化PV-9000二步法检测Bmi-1和ki-67的表达情况,兔抗人Bmi-1多克隆抗体(购自美国Abcam公司,工作浓度1:80),鼠抗人Bcl-2单克隆抗体和鼠抗人ki-67单克隆抗体(购自福州迈新生物技术公司,工作液),PV-9000免疫组化检测试剂盒和DAB显色试剂盒(购自北京中杉金桥生物技术公司)。采用免疫组化双染检测Bcl-2~+/ki-67~-细胞的分布情况,免疫组化双染试剂盒和内源性生物素阻断试剂盒(购自福州迈新生物技术公司)。全部组织芯片和普通石蜡切片均用柠檬酸修复液(pH6.0)高压修复抗原,PBS代替一抗做阴性对照。结果判定:采用半定量计分方法,根据细胞染色强度(A)和染色细胞所占的比例(B)两者乘积来判定。两种评分相乘(A×B),将结果分为:0分为阴性(-);1～4分为弱阳性(+);5～8分为中度阳性(++);9～12分为强阳性(+++)。免疫组化双染采用BCIP/NBT和AEC双显色系统显色,前者阳性反应颗粒为紫黑色,后者阳性反应颗粒为红色,以胞浆出现特异性红色颗粒,胞核未有明显的紫黑色颗粒的细胞判定为Bcl-2~+/ki-67~-细胞。结果Bmi-1在正常胃黏膜、肠上皮化生、不典型增生和胃癌中的表达:胃癌组织中Bmi-1表达(52.5%)显著高于正常胃黏膜(21.6%),(x~2=33.088,P＜0.05)。在肠上皮化生黏膜和不典型增生中Bmi-1蛋白表达的阳性率分别为79.3%和80.8%,均显著高于正常胃黏膜和胃癌,(x~2=74.844,59.819,16.510,13.067,均P＜0.05)。Bmi-1蛋白阳性颗粒主要表达在细胞浆。Bmi-1在胃癌中的表达与Lauren分型、Borrmann分型和胃癌临床病理分期有关(P＜0.05),而与胃癌患者的性别、年龄、组织学分型和淋巴结转移未见相关。ki-67和Bcl-2在胃癌及其癌前病变中的表达和Bcl-2~+/ki-67~-细胞的分布:Bcl-2阳性颗粒表达在细胞浆,ki-67阳性颗粒表达在细胞核。在肠化生黏膜,Bcl-2~+/ki-67~-细胞多分布在腺管隐窝部;在不典型增生中,偶见Bcl-2~+/ki-67~-细胞;在胃癌组织中,Bcl-2~+/ki-67~-细胞散在分布于癌细胞中。ki-67在胃癌中的表达与Borrmann分型有关(P＜0.05),而与胃癌患者的性别、年龄、组织学分型、Lauren分型和淋巴结转移未见相关。Bcl-2在胃癌中的表丛与胃癌Lauren分型有关(P＜0.05),而与胃癌患者的性别、年龄、大体分型、组织学分型和淋巴结转移未见相关。胃癌和肠化生及不典型增生中Bmi-1与ki-67、Bcl-2表达的关系:Bmi-1在胃癌、肠化生和不典型增生中的表达均与Bcl-2呈正相关(r_k=0.157,P=0.043;r_k=0.270,P=0.038;r_k=0.499,P=0.019),Bcl-2在胃癌和肠化生中的表达与ki-67呈正相关(r_k=0.225,P=0.005;r_k=0.309,P=0.035)。结论胃癌及其癌前病变中Bmi-1的异常表达可能与细胞增殖、凋亡和癌变有关。Bmi-1有望成为反映胃癌(尤其是肠型胃癌)临床病理特征的客观标志物。