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目的:2021年世界卫生组织癌症研究机构发布全球最新癌症数据显示,在癌症分布类型上,乳腺癌新增人数达226万,首次超过肺癌（221万）,成为“全球第一大癌症”。目前乳腺癌的临床治疗以手术治疗为主,辅以放疗,化疗,内分泌治疗以及靶向治疗。临床上乳腺癌仍有很高的复发风险,其中化疗耐药导致治疗期间严重的早期复发是乳腺癌化疗亟待解决的难题。肿瘤细胞DNA损伤修复能力的增强会削弱DNA损伤化疗药物产生的细胞毒性,使肿瘤细胞对DNA损伤抗癌药物不敏感。既往研究发现,上皮膜蛋白3（epithelial membrane protein 3,EMP3）在一些肿瘤中发挥抑制作用,但是其在乳腺癌中的作用尚不明确。本研究中生信分析显示EMP3高表达的乳腺癌患者预后良好。EMP3敲低和过表达实验结果显示EMP3抑制乳腺癌细胞进入S期、DNA复制、DNA损伤修复和干性,提高化疗敏感性。此外,EMP3抑制Akt/m TOR信号通路的激活,诱导乳腺癌细胞自噬。YTHDC1为EMP3下游分子,促进乳腺癌细胞DNA复制、DNA损伤修复及化疗耐药。方法:1、TCGA数据库中分析331例EMP3高表达和331例EMP3低表达乳腺癌患者样本中EMP3与总体生存期（overall survival,OS）的关系;Kaplan Meier plotter网站分别分析486例EMP3低表达和916例EMP3高表达的乳腺癌患者样本中EMP3与总体生存期的关系,1079例EMP3低表达和2872例EMP3高表达的乳腺癌患者样本中EMP3与无复发生存期（recurrence-free survival,RFS）的关系,以及539例EMP3低表达和1264例EMP3高表达的乳腺癌患者样本中EMP3与无远处转移生存期（distal metastasis-free survival,DMFS）的关系;CCLE数据库分析57种乳腺癌细胞系中EMP3与其他基因的相关性;GSEA分析TCGA数据库中EMP3高和EMP3低表达乳腺癌样本差异表达的基因通路。2、将sh EMP3慢病毒感染MDA-MB-231、Hs-578t细胞,构建MDA-MB-231、Hs-578t稳转EMP3敲减细胞系;将EMP3过表达质粒瞬时转染MCF7细胞,YTHDC1过表达质粒瞬时转染MDA-MB-231细胞,分别构建MCF7瞬转EMP3过表达细胞系及MDA-MB-231瞬转YTHDC1过表达细胞系。3、Western blot检测MDA-MB-231、MCF7中EMP3、CDK2、CCNE2、PCNA、P21、BRCA1、RAD51、Akt、p-Akt、P70、p-P70、m TOR、p-m TOR、ATG7、P62、p-P62、LC3A/B、YTHDC1表达,Akt抑制剂LY294002（0、1、5、10μM）处理MCF7细胞后YTHDC1的表达。4、Real-time PCR检测MDA-MB-231、MCF7、Hs-578t细胞中BRCA1、RAD51、CD133、EPCAM、CD133、YTHDC1的表达。5、流式细胞术检测MDA-MB-231、MCF7、Hs-578t细胞细胞周期、ADR（500n M）给药48 h后细胞凋亡及CD133和EPCAM表达。6、Ed U染色法检测MDA-MB-231细胞DNA复制。7、免疫荧光染色检测MDA-MB-231细胞中LC3A/B表达,ADR（500n M）给药48 h后MDA-MB-231、Hs-578t细胞中γ-H2AX表达。8、细胞增殖检测MDA-MB-231、MCF7、Hs-578t细胞增殖能力。9、细胞成球实验检测MDA-MB-231、MCF7、Hs-578t细胞成球能力。结果:1、EMP3高表达的患者其总生存期,无复发生存期,无远处转移生存期更长;EMP3与S期相关基因、BRCA1、RAD51、CD133、EPCAM、SOX2、YTHDC1呈负相关;EMP3与细胞周期转换、DNA复制、细胞周期依赖性蛋白激酶呈负相关。2、EMP3敲低的细胞中CDK2、CCNE2、PCNA、BRCA1、RAD51、Akt、p-Akt、P70、p-P70、m TOR、p-m TOR、YTHDC1蛋白表达增加,P21、ATG7、P62、p-P62、LC3A/B蛋白表达降低;EMP3过表达的细胞中CDK2、CCNE2、PCNA、BRCA1、RAD51、Akt、p-Akt、P70、p-P70、m TOR、p-m TOR、YTHDC1蛋白表达降低,P21、ATG7、P62、p-P62、LC3A/B蛋白表达增加;YTHDC1过表达的细胞BRCA1、RAD51蛋白表达增加;随着LY294002浓度增加,YTHDC1表达逐渐降低。3、EMP3敲低的细胞中BRCA1、RAD51、CD133、EPCAM、CD133、YTHDC1表达增加;EMP3过表达的细胞中BRCA1、RAD51、CD133、EPCAM、CD133、YTHDC1表达降低。4、EMP3敲低的细胞中S期细胞比例、CD133和EPCAM阳性细胞数增加,细胞凋亡数目减少;EMP3过表达的细胞中S期细胞比例、CD133和EPCAM阳性细胞数减少,细胞凋亡数目增加。5、EMP3敲低的细胞Ed U阳性细胞数增加;EMP3过表达的细胞Ed U阳性细胞数减少;YTHDC1过表达的细胞Ed U阳性细胞数增加。6、EMP3敲低的细胞LC3A/B、γ-H2AX阳性细胞数降低;EMP3过表达的细胞LC3A/B、γ-H2AX阳性细胞数增加;YTHDC1过表达的细胞γ-H2AX阳性细胞数增加;7、EMP3敲低的细胞增殖能力增加;EMP3过表达的细胞增殖能力降低;YTHDC1过表达的细胞增殖能力增加。8、EMP3敲低的细胞成球能力增加;EMP3过表达的细胞成球能力降低。结论:1、EMP3抑制乳腺癌细胞S期进入、DNA复制、干性及DNA损伤修复,提高乳腺癌细胞化疗敏感性。2、EMP3抑制Akt/m TOR信号通路,诱导乳腺癌细胞自噬。3、YTHDC1是EMP3下游的效应分子,促进乳腺癌细胞DNA复制、DNA损伤修复及化疗耐药。