论文部分内容阅读
目的 肝郁脾虚证是中医临床常见证候，在肿瘤病人的辨证分型中占重要地位。其发生的主要原因是情志不畅和饮食失节，而这两种因素也是肿瘤发生的危险因素。我们在小鼠移植性实体肿瘤和腹水瘤的基础上，用束缚加饮食失节的方法对其施加肝郁脾虚因素刺激，建立了小鼠移植性肿瘤和肝郁脾虚证的病证结合模型；另外，在二乙基亚硝胺诱发大鼠化学性肝癌的基础上，对其施加肝郁脾虚因素刺激，建立了大鼠化学性肝癌和肝郁脾虚证的病证结合模型。观察以上病证结合动物模型中T细胞免疫功能、Th1／Th2细胞亚群平衡的变化，以及肿瘤细胞增殖周期和肿瘤组织鸟氨酸脱羧酶的表达情况。通过对以上实验指标的观察，进一步证实肝郁脾虚因素对肿瘤发生发展的促进作用，并揭示其作用机制。 方法 本研究采用移植性小鼠实体肿瘤、小鼠腹水瘤和二乙基亚硝胺诱发大鼠化学性肝癌三种动物模型，分三个部分进行。每部分实验中，动物均随机分为5组，即正常对照组、单纯肝郁脾虚组、单纯肿瘤组、病证结合组和疏肝健脾中药治疗反证组。病证结合组和中药治疗组在接种S180肿瘤细胞或给予化学诱癌剂同时施加肝郁脾虚因素。观察动物的外观和行为改变、饮食、大便等一般情况，定期称重，绘制体重增长曲线。造模10天后处死小鼠，用MTT比色法检测荷S180实体瘤小鼠脾T、B淋巴细胞增殖功能；摘取胸腺计算胸腺指数，称瘤重观察肿瘤增长率；分别用丝裂原激活淋巴母细胞法和刺激腹腔巨噬细胞产生NO2-法检测脾T淋巴细胞产生Th1型细胞因子IL-2和IFN-γ的能力；并且用ELISA法检测Th2型细胞因子IL-10、IL-4的血清含量。通过检测Th1／Th2型细胞因子判断肝郁脾虚因素对S180荷瘤小鼠Th1／Th2细胞亚群平衡的影响。抽取荷S180腹水瘤小鼠的瘤细胞用流式细胞术检测细胞增殖周期的改变。分别在造模第9周、第14周和第19周取大鼠肝组织，用RT-PCR法检测鸟氨酸脱羧酶的表达。 结果 实验结果表明，在荷瘤小鼠病证结合模型中，肝郁脾虚因素可以明显降低荷S180实体瘤小鼠的细胞免疫功能，T、B淋巴细胞增殖能力和胸腺指数均显著降低，脾T淋巴细胞产生Th1型细胞因子IL-2、IFN-γ的能力显著降低，血清Th2型细胞因子IL-10、IL-4的含量则显著升高，使Th1／Th2平衡向Th2方向漂移，从而加重肿瘤机体的免疫抑制，促进肿瘤免疫逃逸，加快肿瘤生长，使肿瘤重量明显增加。同时，肝郁脾虚因素也可改变小鼠腹水瘤细胞的增殖周期，使S期细胞比率增加，细胞分裂增殖加速。经疏肝健脾中药治疗后，上述各项指标均明显改善，对病证结合模型的成立起到有力的反证作用。在大鼠实验性肝癌与肝郁脾虚证的病证结合模型中也发现，反映肿瘤细胞增殖情况的鸟氨酸脱羧酶表达明显升高，并且随着施加肝郁脾虚因素时间的延长而逐渐升高，以早期最为显著。经疏肝健脾中药治疗后鸟氨酸脱羧酶表达明显下降。 结论 肝郁脾虚因素可以显著降低荷瘤动物的免疫功能，抑制Th1细胞亚群分泌细胞因子，也可增加Th2型细胞因子的分泌，促使Th1／Th2平衡向Th2方向漂移，加重机体的免疫抑制，从而促使肿瘤细胞逃避机体的免疫监视。同时，肝郁脾虚因素也能促进肿瘤细胞增殖，增强肿瘤组织鸟氨酸脱羧酶的表达，进而促进肿瘤的生长。