硝化细菌的富集培养及氨单加氧酶基因片段的PCR扩增

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由硝化细菌催化氨氮氧化的硝化作用是氮循环的关键步骤,也是现代污水处理厂生物处理氨氮废水的重要环节。自然状况下的化能无机自养硝化细菌具有生长速率低、生物量小和对环境因子敏感等生理特点,为了快速获得大量硝化细菌用于炼油化工废水中氨氮化合物的高效去除,我们在实验室里通过富集培养条件优化,直接对活性污泥中的硝化细菌进行富集培养研究。实验结果表明,在pH7.7~8.5、28℃,150 rpm振荡暗培养的条件下,通过不断添加富集培养基,经过6周的培养后,可以使硝化细菌的数量增加32.8倍,硝化速率提高2.76倍,达到了富集的目的。 将氨氧化为亚硝酸盐的氨氧化细菌是硝化菌群的重要组成部分,它的种类随生境差异而有所不同。氨氧化细菌的氨单加氧酶(AMO)催化氨氧化生成羟胺是硝化反应的第一步,也是最为重要的步骤。amoA基因是编码氨单加氧酶活性多肽位点基因,我们通过引物筛选合成了对氨氧化细菌amoA基因特异结合的引物序列,利用PCR技术对活性污泥中的amoA基因片段进行特异扩增,得到的DNA片段大约为490bp。由于基于此引物的扩增对Proteobacteria β-亚科氨氧化细菌具有特异性,所以amoA基因片段的特异扩增为我们检测和鉴定环境样品中氨氧化细菌的种群提供了一个有效的工具。
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